论文部分内容阅读
化疗是癌症治疗的主要方法,但是很多化疗药物容易产生耐药性并且具有毒副作用从而限制了其应用。纳米材料因为其自身的独特性质,在癌症的治疗和诊断中显示出巨大优势,纳米药物的出现为癌症治疗提供了新契机。运用药物运载系统递送药物可以克服耐药,减小毒副作用,提高药物的治疗效果。介孔二氧化硅纳米颗粒(Mesoporous Silica Nanoparticles,MSN)由于具有高的比表面积、大的孔体积、可变的粒径孔径、高热稳定性等独特的结构特点而备受关注,其作为药物运载体具有很大的优势,如毒性低、生物相容性好、载药量高等。同时对其表面修饰可以实现靶向和控释运载药物,达到提高药物疗效、降低毒副作用的目的,这对癌症治疗具有重要意义。透明质酸(HA)是细胞外基质的重要构成成分,具有良好的生物相容性,可以与CD44受体特异性结合,并且肿瘤微环境中存在透明质酸酶,可以降解HA。因此,用HA包覆载药后的MSN可以减缓药物的提前释放,增加纳米药物的选择性,减少毒副作用。叶酸(FA)是一种水溶性B族维生素,可以与叶酸受体特异性结合,并且很多肿瘤细胞表面叶酸受体高表达。因此用FA修饰MSN后运载药物,可以增强纳米药物的靶向性。本文主要是结合MSN在药物运载方面的优势,用HA和FA对MSN进行修饰,研究修饰后的MSN在药物运载方面的应用,本文的研究内容主要包括以下两个方面:1、我们先合成了氮芥-香豆素(DJ-XDS)和5-氟尿嘧啶-香豆素(5-FUA-4C-XDS)两种有机缀合物。然后利用溶胶-凝胶法制备MSN,并用二硫键修饰MSN得到MSN-SS-CS,将两种有机缀合物负载于MSN-SS-CS中,然后用HA分别对其进行包覆,得到MSN-SS-CS@DJ-XDS/HA和MSN-SS-CS@5-FUA-4C-XDS/HA两种MSN纳米复合物。利用透射电镜(TEM)、Zeta电位仪、紫外-可见光分光光度计(UV-vis)、傅立叶红外光谱仪(FT-IR)、热重分析仪(TGA)等对MSN及MSN纳米复合物进行相关表征。采用MTT法检测MSN和MSN纳米复合物的体外生物活性,将MSN和MSN纳米复合物分别与HCT-116、HeLa、QSG-7701三种细胞作用,实验结果表明,MSN材料对细胞几乎无毒,负载有机缀合物后的MSN纳米复合物毒性明显增强。接着,我们通过流式细胞仪、高内涵成像分析系统对纳米复合物与HCT-116细胞作用后的细胞凋亡情况,并检测线粒体膜电位(MMP)和细胞内活性氧(ROS)的变化,我们发现MSN纳米复合物可以使MMP下降、ROS升高,从而诱导细胞凋亡。2、我们首先用FA对MSN表面进行修饰,得到MSN-FA,用FITC分别标记MSNs和MSN-FA(标记后分别记为FMSN和FMSN-FA),并用TEM、Zeta电位、UV-vis、FT-IR、TGA等对修饰前后的MSN进行表征,发现FA很好的修饰在了MSN表面,且FITC成功标记了纳米材料。接下来用MSN和MSN-FA分别对10-羟基喜树碱(HCPT)进行负载,得到MSN@HCPT和MSN-FA@HCPT两种纳米载药体系。细胞吸收实验证明,FA修饰后的MSN更容易进入HeLa细胞(叶酸受体高表达)。MTT细胞毒性实验发现,吸附HCPT后的载药体系具有很好的抗肿瘤活性,FA修饰的载药体系活性更强,证明了FA具有一定的靶向性。此外,我们进行了细胞凋亡的相关实验,检测MMP和ROS含量变化。实验结果表明,MSN@HCPT和MSN-FA@HCPT两种载药体系均可以诱导细胞凋亡,同时使MMP下降、ROS含量升高,且FA修饰的载药体系效果更明显,再次证明了FA修饰载药体系可以增强靶向性、提高治疗效果。