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安莎类抗生素是来源于多种微生物及植物的一类结构独特的抗生素,其结构是由一个脂肪族安莎链通过酰胺桥接作用连接在苯或萘发色基团的非邻近位置而形成的。根据抗生素结构中芳香环的不同可将这类抗生素分为萘醌型安莎类抗生素和苯醌型安莎类抗生素。安莎类抗生素的生物合成都通过衍生于3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)的一个七碳单位mC7N起始。 吸水链霉菌17997是本所从我国土壤中分离得到一株放线菌,经鉴定其产生格尔德霉素。格尔德霉素属苯醌型安莎类抗生素,它可在体内、外抑制癌基因表达产物,并可特异性地与热休克蛋白Hsp90结合影响其功能。近年来,由于其结构独特、作用机制新颖等特点,格尔德霉素在医药及生物学领域备受关注。格尔德霉素衍生物作为抗肿瘤药物已在NCI等单位进行Ⅰ期临床试验,此外,本所还发现格尔德霉素具有良好的广谱抗病毒作用。目前,格尔德霉素生物合成的分子生物学背景还不十分清楚,相关生物合成基因未见报道。深入研究其生物合成机理对于提高产生菌的产量、阐明格尔登霉素构效关系进而优化和改造其结构有重要意义。 我们以大肠杆菌/链霉菌柯斯穿梭载体pKC505构建了插入片段为20-30kb的Streptomyces hygroscopicus 17997基因组文库。根据安莎类抗生素生物合成途径相似的特点,分别利用rifamycin产生菌中4.0kb AHBA生物合成相关基因和PCR获得的0.9kb Ⅰ型PKS基因为探针,通过菌落杂交对基因文库进行了初步筛选,结果由AHBA探针杂交获得了4个cosmids克隆pCGBA20、pCGBA26、pCGBA45、pCGBA83,经测序分析表明pCGBA20中8kbBamHI片段显示与Ⅰ型PKS有较好的同源性;pCGBA26中2.9kbBamHI片段显示与谷胺酰胺合酶有较好的同源性;