背景和目的：　　幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种微需氧革兰氏阴性菌,定植于人上消化道。流行病学资料显示,全世界人群中的H.pylori感染率超过50％,发展中国家甚至超过80%。作为“一级致癌因子”,H.pylori感染后引起胃粘膜慢性炎症,消化性溃疡,并与胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、胃腺癌等消化系统肿瘤密切相关,甚至还与某些血管性疾病、自身免疫系统疾病、皮肤病、糖尿病等其它系统疾病相关。虽然H.pylori发现将近30年,但是其感染途径、发病机制,特别是与肿瘤发生发展机制尚不明确。贲门粘膜组织细胞结构和pH环境与远端胃相比,对H.pylori定植、生存、感染有自身特殊性,关于贲门粘膜组织感染H.pylori后,引发相关病变的报道,较为少见,其H.pylori的致病机制更不明确。研究发现CD74可作为H.pylori的受体,增强H.pylori的吸附能力,加强其致病性。本实验首先用改良Giemsa染色、Hpylori特异性免疫组织化学染色,检测H.pylori在潮汕人贲门普查及活检标本中的分布情况,分析在不同病理改变时H.pylori定植密度的差异;其次运用免疫组织化学染色检测贲门腺上皮CD74蛋白的表达水平,比较分析CD74蛋白表达水平与H.pylori定植密度的关系,进一步运用Simple同部位标记和消除抗体法、免疫荧光双重标记技术,观察CD74蛋白表达与幽门螺杆菌定植分布的原位关系;最后运用免疫组织化学染色检测Ki-67阳性细胞的增殖指数,分析H.pylori定植密度、CD74蛋白的表达与贲门上皮Ki-67阳性细胞增殖水平之间的关系,初步探讨幽门螺杆菌致病机制,为贲门癌前病变的发生发展提供一定的根据。　　材料和方法：　　材料：　　收集汕头大学附属肿瘤医院、汕头大学第一附属医院胃镜室和病理科及揭阳市人民医院病理科普查标本共218例,其中男性146例,女性72例,最小年龄22岁,最大年龄80岁,平均年龄56.6岁。　　方法：　　1.HE染色　　常规HE染色,观察贲门粘膜的炎症等级和上皮增生情况。　　2.Giemsa染色　　改良Giemsa染色,观察H pylori在组织中的定植密度和分布。　　3.免疫组织化学染色　　SP免疫组织化学法:观察H pylori免疫阳性细菌在贲门粘膜组织中分布情况;CD74单克隆抗体免疫组织化学染色,观察腺上皮细胞的表达情况;Ki-67单克隆抗体免疫组织化学染色观察上皮细胞增生情况。　　4.Simple同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记　　Simple同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记技术,观察H pylori和CD74在贲门粘膜组织中的分布,与腺上皮细胞的表达情况,分析幽门螺杆菌的分布位置和CD74的蛋白表达水平的相互关系。　　5.图像分析法　　应用Leica IM50图像采集系统和Image-Pro Plus 6.0图像分析系统,对CD74和Ki-67染色结果分析,CD74蛋白表达水平采样计算图像阳性表达的平均光密度,Ki-67采用计算每张切片的阳性标记指数(Cell proliferation count Cpc),分析表达情况。　　6.统计分析　　应用SPSS13.0对统计结果进行分析,采用方差分析,卡方检验,Spearman相关分析。　　结果：　　1、(1)运用改良Giemsa染色和SP免疫组织化学法检测H pylori的分布发现:H.pylori主要定植于贲门粘膜表面、腺体的腺腔内和血管的周围,部分H.pylori具有红细胞亲和性;　　(2)运用Simple同部位标记、消除抗体法和免疫荧光双重标记技术分析H pylori的分布位置和CD74的蛋白表达水平的相互关系发现:部分H pylori与CD74强表达的细胞结合紧密。　　2、运用单向方差分析发现:H pylori感染阴性和H pylori感染阳性贲门粘膜中CD74表达有显著的统计学差异(p<0.01);在H pylori(+)、H pylori(++)、H pylori(+++)各组之间,随H pylori定植密度加重,CD74的表达相应增强,各组间的差异均有统计学意义(p<0.05)。　　3、(1)运用卡方检验分析H pylori定植密度与炎症等级之间有显著统计学意义X2=20.71(p<0.01):炎症等级随着幽门螺杆菌感染程度加重而升高。　　(2)运用单向方差分析CD74蛋白表达水平与炎症等级有统计学意义(p<0.05)。　　4、运用Spearman相关分析显示:H.pylori定植密度、CD74蛋白表达增强都与Ki-67增殖水平呈正相关(rs分别为0.624和0.515,p<0.01)。　　结论：　　1、H.pylori主要定植于贲门粘膜上皮表面和腺体的腺腔内。　　2、H.Pylori的定植密度与CD74蛋白的表达水平呈正相关,H.Pylori与CD74蛋白强表达的上皮细胞紧密结合,提示CD74作为H.pylori的受体,参与并增强H.pylori在胃粘膜上皮定植,是H.pylori致病的关键环节之一,并且CD74蛋白可能在H.Pylori与贲门上皮细胞间的信号传导中可能发挥相关的作用。　　3、H.pylori感染增加贲门粘膜局部炎症反应,并且CD74蛋白表达增加,提示CD74在H.pylori感染引发的炎症反应中发挥着一定的作用。　　4、H.pylori定植密度、CD74蛋白表达增强均与Ki-67增殖水平呈正相关,提示前二者相互作用在贲门增生等癌前病变中发挥促进作用。