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背景肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一。肝炎病毒感染是造成肝细胞癌诸多致病原因中的首要因素。由于大量的肝炎病毒感染或携带患者,致使我国肝癌发病人数居高不下。HCC切除术后5年复发率高达61.5%,5年生存率仅为30.0%左右。肝癌高恶性程度、高侵袭性的特征,造成肝癌切除术后容易复发转移,预后较差,而早期诊断及早期治疗是提升预后生存的关键手段。为了提高HCC的早期诊断和预后,对HCC发病机制的研究和高灵敏度、高特异性生物标志物的探索成为了HCC研究的热点。肿瘤细胞增殖不受控制是癌症的一个突出特点,探索细胞周期调控蛋白在肿瘤中的机制研究意义重大。ECD蛋白(Ecdysonless,ECD)是一种进化保守的细胞周期调节蛋白。研究发现ECD蛋白在哺乳动物细胞周期调控过程中扮演重要角色,其缺失延缓了G1-S细胞周期进程。多个研究发现ECD能够参与肿瘤的发生发展过程,在乳腺癌、胃癌和胰腺癌中均有显著表达,并且其过表达可作为预后不良的因素,说明其可作为一种有效的肿瘤标志物。然而ECD在肿瘤中的详细分子机制仍不明朗,有待深入研究并在其他肿瘤中进一步验证。核不均一核糖核蛋白(Heterogeneous nuclear ribonucleo protein,hnRNP)家族是一类RNA结合蛋白,它们负责RNA的转录后调控,在pre-mRNA剪接、DNA修复、端粒发生、细胞信号传导、转录和翻译水平调控基因表达等方面具有广泛的作用。hnRNPs的异常表达与癌细胞增殖、血管生成、侵袭、上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)和转移有关。研究发现hnRNPF作为其家族一员可能在pre-mRNA选择性剪切过程中发挥重要作用。pre-mRNA剪切是真核细胞DNA表达转录后调控的关键步骤,同时,也是许多疾病(包括癌症)发生的关键,一些肿瘤分子依赖于特定的RNA剪接。本研究通过对ECD和hnRNPF在肝癌中表达情况、二者与临床特征及患者预后情况进行相关分析,以期寻找新的生物标志物,为肝癌的诊治提供新思路。目的检测ECD和hnRNPF在HCC中的表达情况,分析两者相关性并探讨两种蛋白与临床特征及预后之间的关系。方法1、通过Oncomine和GEPIA数据库平台检索ECD和hnRNPF在HCC中的表达及与患者预后的关系。2、收集手术切除的肝癌、肝硬化及正常肝组织各15例,提取新鲜组织中的ECD和hnRNPF蛋白及mRNA,利用qRT-PCR和Western Blot法检测组织中mRNA和蛋白水平上表达差异。3、收集76例肝癌及癌旁组织的石蜡包埋切片,利用免疫组化方法检测ECD和hnRNPF在肝癌及癌旁组织中的表达情况,分析两者与肝癌患者临床特征之间的关系,并分析二者表达是否存在相关性。4、结合76例肝癌患者免疫组化结果及患者随访数据,分析ECD和hnRNPF是否能够作为肝癌预后的独立危险因素并绘制生存曲线。结果1、基于Oncomine数据库Roessler liver 2样本数据集显示ECD和hnRNPF mRNA在肝癌组织中高表达(P<0.05);基于GEPIA数据库发现在HCC中两蛋白存在正相关关系(r=0.69,P<0.05)并且高表达影响肝癌患者的预后生存。2、Western Blot和qRT-PCR结果显示,无论是蛋白水平还是mRNA水平,相较于正常组织和肝硬化组织,ECD和hnRNPF在肝癌中的表达都是显著升高的(P<0.05)。3、免疫组化结果显示,ECD和hnRNPF在肝癌中的表达均高于相应癌旁组织;并且在HCC中ECD表达高低与性别(P=0.022)、肿瘤的大小(P=0.003)、是否有血管浸润侵犯(P=0.023)、TNM分期(P=0.023)、Edmondson-Steiner病理分级(P=0.016)相关;hnRNPF表达高低与肿瘤的大小(P=0.013)、Edmondson-Steiner病理分级(P=0.005)相关;二者的表达成正相关关系(r=0.582,P<0.001)。4、单因素及多因素COX回归结果显示ECD表达水平、hnRNPF表达水平、肿块大小、血管侵犯情况、Edmondson-Steiner病理分级与HCC患者术后总生存率有关(P<0.05),高表达的ECD和hnRNPF是影响HCC患者术后预后生存(HR=4.047,P=0.013;HR=3.575,P=0.021)的独立危险因素。Kaplan-Meier生存曲线图显示,相较于低表达组,高表达ECD和hnRNPF的HCC患者术后生存期明显较低(Log Rank P<0.05)。结论1、ECD和hnRNPF在肝癌组织中呈高表达,ECD和hnRNPF可能参与肝癌的发生发展过程。2、ECD和hnRNPF高表达的HCC患者术后总生存时间相较于低表达组明显缩短,两蛋白高表达可以作为影响预后生存的独立危险因素。