厚壳贻贝是我国沿海地区的重要经济水产贝类,同时也是一种海洋污损生物。生物被膜是海洋生态系统中关键的组成成分,并提供能够显著影响整体群落组成的生化线索。鞭毛作为细菌原核生物的运动器官,不仅影响着其运动能力,还参与很多微生物的生理活动过程,包括对生物被膜的形成过程。研究表明,鞭毛具有一定的毒性,可引起宿主的免疫反应,进而影响宿主的生理活动。细菌鞭毛的合成是由多级鞭毛调控基因控制合成蛋白进而组装形成鞭毛,那么鞭毛调控基因是否会通过调控鞭毛合成进而影响生物被膜的生物学特性,从而影响厚壳贻贝的附着,还是鞭毛是否会直接影响厚壳贻贝的附着,关于这两种影响厚壳贻贝附着的机制我们尚未得知。在本论文中,我们构建了Pseudoalteromonas marina鞭毛基因fli P缺失突变菌株,并提取了P.marina菌株的鞭毛蛋白,主要研究了鞭毛基因fli P、鞭毛提取蛋白对生物被膜形成和厚壳贻贝附着的影响。本研究结果如下:1.P.marina鞭毛基因fli P对生物被膜形成及厚壳贻贝幼虫附着变态的影响为研究海洋假交替单胞菌(P.marina)鞭毛相关调控基因对厚壳贻贝幼虫附着变态的影响,进一步验证鞭毛调控基因的功能。本研究通过敲除P.marina染色体上与鞭毛合成蛋白相关的基因fli P,构建了fli P基因缺失突变菌株,并比较分析了野生菌与fli P基因缺失突变菌的特性。实验表明:相比较野生型菌株,Δfli P菌株表型变得褶皱,并丧失了鞭毛结构和运动能力,在玻璃载玻片上生物被膜形成能力相比与野生菌提高了两倍;其形成生物被膜对厚壳贻贝幼虫的附着变态率相比野生菌下降约77%。共聚焦拍摄和酶处理生物被膜实验表明:生物被膜上β多糖减少和蛋白增加导致幼虫附着变态率下降。此外,Δfli P菌株鞭毛缺失,提取野生型菌株鞭毛蛋白,对厚壳贻贝幼虫进行药理学实验刺激,发现鞭毛蛋白能够促进厚壳贻贝幼虫发生附着变态;把鞭毛蛋白滴加到fli P缺失突变菌形成的生物被膜上,幼虫附着变态率基本上升到和野生菌生物被膜一样。以上结果实验表明:鞭毛合成蛋白基因fli P的缺失导致菌株鞭毛消失,生物被膜上β多糖减少和蛋白增加,以上结果共同作用降低了厚壳贻贝幼虫发生附着变态。2.P.marina鞭毛提取蛋白对生物被膜形成及厚壳贻贝稚贝附着的影响本实验以对稚贝附着具有较高诱导活性的海洋细菌P.marina为对象,采用酸解超速离心法提取P.marina的鞭毛提取蛋白,调查了P.marina鞭毛提取蛋白在生物被膜形成前添加和形成后添加,对生物被膜生物学特性的影响,及对稚贝附着的影响。实验表明,把P.marina鞭毛提取蛋白与0.4%的Agarose海水溶液混合涂抹在玻璃载玻片上冷凝后形成混合凝胶能够显著促进厚壳贻贝稚贝的附着,鞭毛提取蛋白与细菌共同形成的生物被膜、滴加鞭毛提取蛋白于生物被膜上;这两种方式均能提高稚贝附着率。实验分析发现,第一种鞭毛提取蛋白添加方式即鞭毛提取蛋白与细菌共同形成的生物被膜,与野生型单一生物被膜相比,细菌生物量明显提高,生物被膜上细菌聚集成堆,以至于膜上细菌密度增大,膜厚增加;生物被膜上α多糖增加,但无显著差异性,β多糖、蛋白和脂质呈显著变化增加;第二种鞭毛提取蛋白添加方式即滴加鞭毛提取蛋白溶液与生物被膜上室温静置1-2小时,与野生型单一生物被膜相比,细菌生物量、细菌密度和膜厚无变化,胞外α多糖、β多糖和胞外脂质无显著性变化,而胞外蛋白显著性增加。综上说明,不同添加方式的鞭毛提取蛋白可直接或间接提高稚贝附着率。