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研究背景和目的糖尿病肾病(Diabetic nephropahy,DN)是糖尿病患者最常见血管并发症之一,其发病率在全球范围内呈逐年上升趋势,已经成为严重威胁人类健康的全球性公共卫生问题。终末期氧化蛋白产物(Advanced oxidation protein products,AOPP)是氧化应激过程中形成的蛋白质产物。有研究表明,糖尿病动物模型中AOPP蓄积能促进肾组织纤维化。蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)系统,又称为磷脂肌醇信号途径,在多种细胞线粒体损伤、激活氧化应激、促进纤维化过程中发挥关键作用。有研究证实,DN中AOPP蓄积可以通过激活PKC信号通路触发足细胞损伤,PKC在DN纤维化中发挥重要作用。DN发病机制复杂,尚未完全阐明,目前缺乏特异的治疗方法。因此,进一步深入研究DN发病机制,积极探索延缓其进展的新治疗策略具有重要的现实意义。足细胞损伤、肾小球纤维化是DN发生发展的关键因素。通过查阅文献,我们发现肾小管间质纤维化(Tubulointerstitial fibrosis,TIF)在DN中发挥重要作用,其机制研究日益受到重视。但TIF机制复杂,尚未完全阐明。本研究旨在探讨DN中AOPP蓄积对肾小管间质纤维化的作用及其可能机制。方法1、选取行肾活检的DN患者33例和薄基底膜肾病患者10例。收集患者血及尿液标本,分析肾损害相关指标。免疫组化检测肾组织相关分子表达,Masson’s trichrome染色评估TIF。Pearson分析DN患者肾组织AOPP蓄积及pPKCη表达与肾损伤相关指标(Scr,尿NAG,eGFR)的相关性。2、我们设计了如下几组细胞实验,实验1:HK-2细胞分别用MNA、NG、HG浓度的糖干预;实验2:以5,15,30mM浓度的葡萄糖干预72小时;实验3:以30mM葡萄糖分别干预12,36,72小时;实验4:HK-2细胞用HG培养1周后,AOPP分别以50,100,200μg/mL浓度干预72小时;实验5:HK-2细胞用HG培养1周,AOPP(200μg/mL)干预72小时,最后分别使用PKC抑制剂(Go6983,Myr和Rottlerin)干预72小时。上述实验完成后收集细胞,使用 Western blot 检测 AOPP、CD36、Fibronectin、pPKCη和 pPKCδ蛋白表达。3、STZ糖尿病大鼠,经AOPP干预,用PKC抑制剂(Go6983、Myr和Rottlerin)治疗,分组如下:(1)正常对照组(NC);(2)糖尿病对照组(DM_RSA);(3)糖尿病大鼠AOPP干预组(DM_AOPP);(4)糖尿病大鼠AOPP及PKCη抑制剂治疗组(DM_AOPP+Myr);(5)糖尿病大鼠AOPP及PKC非选择性抑制剂治疗组(DM_AOPP+Go6983);(6)糖尿病大鼠AOPP及PKCδ抑制剂治疗组(DM_AOPP+Rottlerin)。12周后免疫组化检测肾组织检测相关分子表达;天狼星红染色观察肾组织病理改变。分析大鼠肾损害相关指标。结果1、DN患者肾小管上皮细胞空泡样变伴AOPP蓄积;DN患者肾组织pPKCη表达增加,伴随Fibronectin表达上调,小管间质纤维化加重;AOPP蓄积及pPKCη表达增加均预示着DN患者肾功能下降,AOPP可能通过激活PKC通路加重小管间质纤维化,损伤肾功能。2、HG 条件下 HK-2 细胞 AOPP、CD36、pPKCη和 Fibronectin 的蛋白表达呈时间、浓度依赖方式梯度上调;外源性增加AOPP干预进一步增加CD36、pPKCη和Fibronectin的蛋白表达,加重细胞纤维化;抑制PKCη,CD36及Fibronectin表达下降,细胞纤维化减轻。3、AOPP加重糖尿病大鼠肾功能损伤,明显诱导肾组织pPKCη及Fibronectin的表达,加重TIF;抑制PKCη,则可减轻大鼠肾功能损伤,抑制Fibronectin表达,减轻TIF。结论糖尿病肾病中AOPP可通过激活PKCη促进小管间质纤维化。