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AD5-10是一株新的鼠抗人死亡受体5(death receptor 5，DR5)单克隆抗体，为本实验室在前期研究中获得，能够强烈诱导多种肿瘤细胞系发生凋亡，抑制小鼠体内移植瘤的生长，对人正常肝细胞和人外周血淋巴细胞没有明显的诱导毒性，已成为研发生物类药物的候选者，具有抗肿瘤作用的应用前景。但是研究发现，某些肿瘤细胞对AD5-10的诱导却表现为明显的抗性，其抗性是否具有一定的表现规律，其内在的调控机制又是什么，仍然是目前一个有待阐明的科学问题。本论文拟选用肺癌细胞系A549、SCLC、H460、H1299和Calu-3，分析细胞表面DR5表达水平与细胞对AD5-10诱导凋亡敏感性之间的关系；并进一步寻找凋亡相关调节分子，研究其调节细胞对AD5-10诱导凋亡敏感性的内在分子机制。本研究所选的五株肺癌细胞中，A549和SCLC细胞对AD5-10中度敏感，其他三株细胞对AD5-10不太敏感。研究表明，这五株肺癌细胞对AD5-10的敏感性与细胞中DR5的表达水平无关。但发现，使用AD5-10处理，敏感或中度敏感细胞中，c-FLIP_L发生明显的切割，c-FLIP_L的表达量显著下降；而不太敏感或抗性的细胞中的c-FLIP_L的表达水平没有明显变化。表明c-FLIP_L是参与调节AD5-10诱导细胞凋亡的关键分子。进一步研究证明，c-FLIP_L过量表达可以部分抑制人T淋巴细胞白血病细胞SVT35、人肺癌细胞A549对AD5-10的敏感性；而亚毒性浓度的化疗药物环磷酰胺(CHX)、放线菌素D(ActD)能通过下调细胞中c-FLIP_L蛋白表达水平，增强AD5-10对肺癌细胞的杀伤活性。此外，通过c-FLIP_L siRNA特异抑制细胞中的c-FLIP_L的表达，可以显著增强多种肺癌细胞对AD5-10诱导凋亡的敏感性。其调节机制是c-FLIP_L siRNA和AD5-10能激活细胞中caspase依赖的信号通路，下调Bcl-2家族蛋白Bid和Bcl-X_L的表达，进而促进线粒体膜电位的降低以及细胞色素C的释放。并且，研究证明c-FLIP_L siRNA和AD5-10联合作用对正常人细胞没有毒性。最后，我们检测了人肺癌组织中c-FLIP_L的表达，结果显示c-FLIP_L特异高水平表达于人肺癌纽织中的肿瘤细胞中，而在正常组织和肿瘤细胞周围间质细胞中表达量很低，两者在统计学上具有显著差异。以上研究提示特异下调c-FLIP_L可能是一种非常有潜力的治疗肺癌的策略，特别是针对那些对功能性单抗单独作用产生抗性的肿瘤病人。第二部分研究中，本文还利用AD5-10可变区基因，构建了表达鼠单链抗体(ScFv)的原核表达载体，并获成功表达。初步证明了它们的肿瘤杀伤活性。同时，我们将AD5-10的可变区基因和人抗体恒定区基因，分别克隆入表达载体pKN100VL和pG1D105VH，通过筛选获得了稳定表达和分泌人-鼠嵌合抗体(anti-DR5 mV-hH)的重组细胞；分泌表达的嵌合抗体与人DR5蛋白具有特异性结合活性，并且能明显杀伤体外培养的人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞，为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。