【摘 要】
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背景: 现代中医理论认为干细胞从产生到功能均与传统中医理论中的“先天之精”有显著关联。中医经典理论认为藏腑中的“肾”是成年个体储存“先天之精”器官。因此,具有补肾
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背景: 现代中医理论认为干细胞从产生到功能均与传统中医理论中的“先天之精”有显著关联。中医经典理论认为藏腑中的“肾”是成年个体储存“先天之精”器官。因此,具有补肾、益气、养血功能的中药材(地黄)可能对干细胞的生物学特性发挥效应。 目的: 观察骨骼肌成肌细胞(SMs)移植治疗心肌梗死(MI)时地黄低聚糖(RGOs)的治疗作用,并在离体培养细胞水平,探索这种治疗作用的产生机制。 方法: 第一部分:以鲜地黄用热乙醇和热水提取,以阳离子和阴离子交换,再经离子交换树脂洗脱得到其纯化物,以HPLC法检测其纯度。 第二部分:分离成年大鼠SMs,给予不同浓度RGOs干预,记录生长曲线,观察其对SMs增殖影响以及对IGF-Ⅱ分泌的作用;用免疫组化的方法检测RGOs干预后,SMs内CX-43、TNI、CK-MR等心肌特异性物质的表达;运用膜片钳技术研究SMs与心肌细胞瞬时外向钾电流的差异以及RGOs的影响;最后以流式细胞仪检测RGOs对缺氧条件下SMs的抗凋亡作用。 第三部分:9只贵州香猪分为3组,经冠状动脉内球囊封堵构建小型猪急性MI模型14天后,分别经心外膜在梗死区域给予空白生理盐水对照、自体SMs移植、自体SMs移植联合RGOs粗提物4g/天治疗30天。以心脏超声评价各组动物在治疗后心功能变化情况,以组织多普勒比较细胞移植区域的心肌收缩力变化:以24小时动态心电图观察移植术后24小时内的心律失常;以骨髓涂片观察骨髓动员情况、流式细胞仪检测外周血CD34+数目,并检测各组动物血清IGF-Ⅱ的差异。最后,以免疫组化和大体病理观察SMs移植区域心肌修复情况。
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