不同浓度局部给氧联合间歇负压对兔耳缺血性创面的影响

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiushuiweishen
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目的:本实验在构建的缺血性创面动物模型上,探讨两种不同氧流量局部给氧联合间歇负压封闭引流在对兔耳缺面性创面愈合的影响。通过分组治疗制备的创面模型的对比性研究,完善氧流量值对促进创面愈合的相关性作用。为提高慢性难愈性创面的修复能力提供进一步实验依据。方法:随机选取西南医科大学实验动物中心12只健康家兔,雌雄不限,3?4月龄大小。双耳背脱毛、消毒、麻醉后结扎中央动脉和边缘动脉,保留尾端动脉和全部静脉,于兔耳背制作2×2cm去除表皮及真皮部分组织,保留软骨膜及部分皮下组织制备缺血创面。24个创面随机分为6组,A组:空白对照;B组:(氧流量2L/min);C组:(氧流量5L/min);D组:单纯负压;E组:氧+负压(氧流量2L/min);F组:氧+负压(氧流量5L/min)。可调节负压模式设定为间歇负压(工作5分钟,暂停2分钟),负压值为75mmHg。分别在术后第5、7、10、14天采用Image-Pro Plus6.0版图像分析软件测量各组创面面积,据公式计算创面愈合率;各组分别在对应时间点切取创面中心及边缘组织,HE染色观察组织新生血管及胶原纤维(Collagen fiber,Fb)分布情况;RT-PCR测定创面组织血小板源性生长因子mRNA(Platelet source growth factor mRNA,PDGF mRNA)的表达、白介素-6(Interleukin–6,IL-6)mRNA的表达;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)测定缺氧诱导因子1-α(Hypoxia inducible factor 1-alpha,HIF-1α)蛋白表达。结果:1、创面愈合率:各治疗组均显著高于A组,组间比较差异均有统计学意义(P(27)0.05),D组第5、7、10、14天创面愈合率为(45.65±0.95、57.16±0.71、82.75±3.31、94.1±1.32)与B组第5、7、10、14天创面愈合率(38.19±0.51、41.69±0.92、68.56±0.50、87.03±0.59)、C组第5、7、10、14天创面愈合率(41.48±1.60、43.36±0.84、71.72±1.79、89.16±1.01)组间比较差异均有统计学意义(P(27)0.05),B组、C组各时相点两两比较差异均有统计学意义(P(27)0.05),E组第5天、7天、10天、14天创面愈合率分别为(50.99±1.09、64.58±0.89、88.55±0.21、97.12±0.83)、D组组间比较差异也具有统计学意义(P(27)0.05),F组第5天、7天、10天、14天创面愈合率分别为(54.29±0.48、67.70±2.39、89.57±0.40、98.34±0.35)、D组组间比较差异也具有统计学意义(P(27)0.05),E组、F组各时相点组间比较差异也具有统计学意义(P(27)0.05)。各组创面愈合率的顺序:F组最快,E组、D组次之,B组、C组较慢,A组最慢。2、组织学观察:HE染色显示A组新生毛细管和胶原纤维最少,B、C两组次之,D组可见新生毛细血管数量较B、C组多,部分毛细血管壁不完整,胶原纤维排列无序,E组、F组新生毛细血管和胶原纤维均表达丰富,其中F组新生毛细血管内红细胞充盈,胶原纤维排列规则。各组表达量顺序:F组(29)E组(29)D组(29)B、C组(29)A组。3、创面PDGFmRNA的表达:各治疗组均较空白对照组有统计学意义(P(27)0.05),氧疗B、C组两两比较差异无统计学意义(P(29)0.05),D组与E组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05),D组与F组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05),E、F组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05)。各组表达量顺序:F组(29)E组(29)D组(29)B、C组(29)A组。4、创面IL-6mRNA的表达:各治疗组均较空白对照组有统计学意义(P(27)0.05),氧疗B、C组两两比较差异无统计学意义(P(29)0.05),D组与E组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05),D组与F组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05),E、F组比较差异具有统计学意义(P(27)0.05)。各组表达量顺序:F组(29)E组(29)D组(29)B、C组(29)A组。5、免疫组化:应用Image-Pro Plus6.0版图像分析软件测量各组创面HIF1–α吸光度值得出:B组第5天、7天、10天、14天HIF1–α蛋白表达量分别为(0.36±0.06、0.27±0.03、0.24±0.02、0.18±0.03)、C组第5天、7天、10天、14天HIF1–α蛋白表达量分别为(0.34±0.04、0.24±0.03、0.22±0.02、0.18±0.01)较空白A组第5天、7天、10天、14天HIF1–α蛋白表达量分别为(0.43±0.05、0.31±0.02、0.27±0.03、0.24±0.03)组间比较差异均具有统计学意义(P(27)0.05),B组、C组两两比较差异无统计学意义(P(29)0.05),D组第第5天、7天、10天、14天HIF1–α蛋白表达量分别为(0.53±0.03、0.39±0.08、0.33±0.05、0.27±0.04)较空白A组差异有统计学意义(P(27)0.05),E组第5天、7天、10天、14天HIF1–α蛋白表达量分别为(0.47±0.05、0.35±0.03、0.29±0.05、0.24±0.04)、F组对应表达量分别为(0.40±0.06、0.28±0.03、0.24±0.05、0.22±0.06)较D组差异有统计学意义(P(27)0.05)。E、F组两两比较差异有统计学意义(P(27)0.05)。各组表达量顺序:D组(29)E组(29)A组(29)F组(29)B组(29)C组。结论:间歇负压封闭引流联合局部氧疗对兔耳缺血性创面的修复具有促进作用。采用TOT(氧流量值5L/min)+间歇负压吸引模式(负压值-75mmHg,吸引5min,停止2min)优于其余治疗组,增加创面愈合率。其机制可能是通过改善创面低氧环境,促进创面新生血管再生和胶原沉积,与PDGFmRNA高表达、降低HIF 1–α蛋白与IL-6mRNA基因表达相关。
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