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目的：
观察咪唑啉2受体配体2BFI对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统(CNS)内胶质细胞反应和MCP-1、MMP-9、ICAM-1表达的影响，探索咪唑啉受体与ERE之间的关系以及不同的作用途径。
方法：
将雌性C57BL/6小鼠40只随机分为5组：空白对照组(CFA-saline)，模型对照组(ERE-saline)，2BFI干预组(EAE-2BFI)包括：EAE+2BFI5 mg·kg-1组(EAE-2BFI5)、EAE+2BFI10 mg·kg-1组(EAE-2BFI10)和EAE+2BFI20mg·kg-1组(EAE-2BFI20)。模型对照组：用MOG免疫C57BL/6小鼠制作EAE模型；2BFI干预组：造模方法同模型对照组，并且EAE-2BFI5组、EAE-2BFI10组、EAE-2BFI20组分别于免疫当天开始注射2BFI5 mg·kg-1、10mg·kg-1、20 mg·kg-1，每天两次腹腔注射给药，连续14天；CFA-saline组：用等量CFA替代MOG免疫小鼠。EAE-saline组和CFA-saline组用等量生理盐水(NS)替换2BFI腹腔注射给药，所有动物的给药方式、程序相同。免疫当日定为第0天，每日观察并记录动物行为学及体重的变化。各组动物在ERE模型对照组发病高峰期处死(18-20天)，取脑和脊髓，用多聚甲醛固定，行HE染色。通过免疫组化法(SABC法和SP法)测定GFAP、Iba-1、MCP-1、MMP-9的表达；RT-PCR法测定MMP-9、ICAM-1 mRNA的表达水平。
结果：
(1)行为学观察：EAE-saline组小鼠最早发病于免疫后第13天(13dpi)，潜伏期为(14.2±1.17)dpi，表现为活动减少、进食减少、体重减轻，先出现尾巴张力降低、尾巴拖地不能抬起，继而步态异常、后肢无力、瘫痪。各观察组动物ERE诱发率分别为CFA-saline组(0/8)，ERE-saline组(6/8)，EAE-2BFI5组(4/8)，EAE-2BFI10组(2/8)，ERE-2BFI20组(2/8)，显示2BFI干预后EAE诱发率呈下降趋势，但统计学比较无显著差异，可能与计数资料的样本量过少影响统计的效度与信度有关。EAE-2BFI5组、ERE-2BFI10组、EAE-2BFI20组潜伏期分别为(14.8±1.89、14.5±0.35、15.00±0.00)dpi，与EAE-saline组比较均无显著差异。ERE-2BFI5组、ERE-2BFI10组、EAE-2BFI20组的最大临床症状评分平均值(2.3±2.49、0.9±1.64、0.5±0.93)较EAE-saline组(4.0±2.63)明显降低(P<0.05、P<0.01和P<0.01)。CFA-saline组小鼠未见神经功能受损症状。
(2)病理学改变：EAE组脑脊髓内可见大量的炎性病灶，病灶处小血管管周有大量的炎性细胞浸润，成“袖套”样改变，伴有脊膜增厚。从形态学上看浸润的炎性细胞以淋巴细胞为主，可见一定量的巨噬细胞。EAE-2BFI干预组小鼠脑脊髓炎性浸润明显减少。EAE-2BFI5组、EAE-2BFI10组、EAE-2BFI20组病理评分分别为(1.1±1.24、0.625±1.19、0.625±1.19)较EAE-saline组(2.5±1.69)明显减少(P<0.05、P<0.01和P<0.01)。CFA-saline组小鼠未观察到炎性细胞浸润。
(3)免疫组化结果：与CFA-saline组相比，EAE-saline组小鼠CNS内星形胶质细胞数目和小胶质细胞数目均明显增加。与EAE-saline组相比，EAE-2BFI干预组CNS内星形胶质细胞增多而小胶质细胞明显减少。CFA-saline组小鼠CNS内MCP-1无明显表达，EAE-saline组小鼠CNS内的MCP-1表达升高。EAE-2BFI干预组小鼠CNS内MCP-1的表达较EAE-saline组明显减少(P<0.01)。EAE-saline组小鼠大脑内的MMP-9表达升高，EAE-2BFI干预组小鼠大脑内MMP-9的表达较EAE-saline组明显减少(P<0.01)。CFA-saline组小鼠大脑MMP-9无明显表达。
(4)RT-PCR结果：与CFA-saline组比较，EAE-saline组小鼠CNS内MMP-9、ICAM-1mRNA表达水平明显增加，与EAE-saline组比较，EAE-2BFI干预组小鼠CNS内MMP-9、ICAM-1mRNA表达水平降低，统计学有显著差异。其中EAE-2BFI10组和EAE-2BFI20两组对两种因子的表达水平降低作用更为明显(P<0.01)。
结论：
(1)2BFI干预对小鼠EAE具有保护作用，EAE发病率呈降低趋势，2BFI减轻了EAE临床症状和病理损伤程度，其有效剂量在5-20 mg·kg-1之间。
(2)2BFI对EAE小鼠CNS中的星形胶质细胞有增殖活化作用，同时抑制了小胶质细胞的增殖活化，从而减轻EAE的CNS炎症细胞反应。
(3)2BFI可能对MCP-1、MMP-9和ICAM-1有调节作用，减轻了EAE中BBB的破坏程度，进而阻止T淋巴细胞从外周不断向CNS迁移募集的后续反应，对于减缓EAE的炎症损伤起一定的作用。