RACK1对肺腺癌细胞株A549生物学行为及VEGF,Bcl-2,CyclinD1表达的影响

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:sdhok
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目的:研究RACK1基因沉默对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响,探究其对VEGF,Bcl-2,CyclinD1表达的影响。方法:采用脂质体转染法将针对RACK1基因的RACK1 shRNA及空载质粒分别转染至A549细胞中,分别设稳定转染的实验组、阴性对照组和空白对照组,并进行以下实验:(1)Western Blot法检测转染前后的A549细胞中RACK1蛋白表达的变化;(2)CCK-8法、平板克隆形成实验以及软琼脂集落形成实验检测shRNA干扰后细胞的生长增殖状况;(3)划痕愈合实验观察体外A549细胞运动迁移的改变;(4)流式细胞术检测A549细胞周期和细胞凋亡率的变化;(5)Western Blot法检测转染前后的A549细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、抗细胞凋亡基因(Bcl-2)、细胞周期蛋白Dl(CyclinD1)表达的变化。结果:(1)Western blot检测显示,在shRNA干扰48 h后,转染了特异性针对RACK1的shRNA的4组细胞RACK1蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05),其中转染了shRNA1的A549细胞组的RACK1蛋白表达水平较另外三组的表达水平显著降低(P<0.05),而空载质粒干扰A549细胞后,RACK1的表达无明显变化(P>0.05);(2)CCK-8法、平板克隆形成实验显示实验组细胞生长明显受到抑制(P<0.05);(3)划痕愈合实验表明实验组细胞的迁移能力显著减弱(P<0.05);(4)流式细胞术检测发现实验组细胞G0/G1期比例增加、凋亡率增高(P<0.05);(5)Western blot结果显示,实验组A549细胞内VEGF,Bcl-2,CyclinD1的表达明显下调(P<0.05)。结论:RACK1基因沉默能抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移,诱导其凋亡,下调VEGF,Bcl-2,CyclinD1的表达。
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