研究背景大肠癌是消化道疾病的一种常见的恶性肿瘤，在全球范围内男性患者发病率排第3位，女性患者则更高达第2位。但是目前对于结肠癌的早期诊断率还不高，很多患者前来就诊时已是处于进展期。而目前用于结肠癌辅助诊断的的CEA等最广泛使用的肿瘤标志物的敏感性和特异性都不高。所以迫切需要一些更具敏感性和特异性的肿瘤标志物。膜联蛋白(Annexin)是一组钙离子依赖的磷脂结合蛋白，存在于大多数真核生物细胞内且表达量丰富。目前膜联蛋白家族中多名成员已被发现与多种肿瘤具有相关性，而Annexin A5作为膜联蛋白家族中分布最多和最广泛的一个，其相关的临床意义及基础研究在国内外却很少报道。研究目的通过验证Annexin A5与结肠癌是否存在相关性，并进一步研究AnnexinA5对结肠癌细胞株的功能影响，同时初步研究Annexin A5参与结肠癌细胞的凋亡机制。为Annexin A5作为临床早期诊断和治疗结肠癌的辅助工具提供理论基础。研究方法1、通过Annexin A5血清ELISA方法检测研究Annexin A5在结肠癌的肿瘤分期中的变化。2、从四株结肠癌细胞株中筛选出Annexin A5表达量最高的细胞株，并选用慢病毒载体和RNAi干扰技术，沉默Annexin A5在细胞中的表达来观察肿瘤细胞在粘附、侵袭、迁移、凋亡、细胞周期、增殖功能方面的改变。3、运用Westernblot、RT-PCR研究Annexin A5参与结肠癌凋亡作用的机制。研究结果1、TNMⅢ/Ⅳ期的结肠癌患者中，血清Annexin A5的含量显著高于TNMⅠ/Ⅱ期，同时显著高于正常对照组，并且其表达量与淋巴结是否转移密切相关。2、RKO结肠癌细胞株的Annexin A5的表达量最高。而Annexin A5沉默后的RKO结肠癌细胞株的增殖率和平板克隆形成率提高，凋亡率下降，同时出现G2/M的阻滞，但是对于其侵袭、迁移以及粘附能力无明显影响。3、Annexin A5沉默后的RKO结肠癌细胞的Bax的mRNA表达下降，蛋白表达量的变化无明显统计学差异；Bcl-2的mRNA与蛋白表达量皆上升；磷酸化的Erk1/2蛋白表达量上升研究结论1.结肠癌患者血清中的CEA特异性、敏感性与前期实验和文献报道的结果大致相同，而Annexin A5在结肠癌患者血清中的特异性、敏感性要高于CEA。2.Annexin A5在分化较差的RKO结肠癌细胞株中表达最高，与Annexin A5在分期较差的癌组织中高表达的趋势相符。3.Annexin A5在肿瘤细胞生物学特性实验中促进肿瘤细胞凋亡、抑制增殖，但在结肠癌患者血清中同时高表达现象的相关机制需要进一步明确。4.Annexin A5参与Erk1/2的相关凋亡途径，并促进Bcl-2及Bcl-2/Bax的比率的升高，其中详细机制需要进一步的实验确认。