研究目的1.鼻咽癌是一类恶性程度非常高的肿瘤,因鼻咽位置隐匿,大部分病人就诊时已经是局部晚期或者远处转移,远处转移是鼻咽癌患者治疗失败的主要原因。因此,目前迫切需要寻找新的靶点以及研发新的药物以提高转移性鼻咽癌的疗效。2.梳状同源物增强子1（enhancer of polycomb homolog 1,EPC1）基因是表观遗传抑制因子PcG家族重要成员之一,在多种恶性肿瘤中表现为致癌潜能,但是EPC1在鼻咽癌中的表达和作用尚不明确,本研究在体内外实验及临床病例上探索EPC1在鼻咽癌中的表达和生物学功能及预后价值。研究方法1.利用加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）筛选鼻咽癌发生发展的核心基因。2.采用qRT-PCR检测鼻咽癌细胞及组织和正常鼻咽上皮细胞及组织中EPC1差异表达;在临床病例上探究EPC1表达与鼻咽癌患者临床病例特征及预后的相关性,探索EPC1在鼻咽癌诊治中的意义。3.构建EPC1沉默鼻咽癌细胞系（si-EPC1）,采用CCK8、克隆形成实验、流式细胞、Transwell实验等实验技术探索EPC1在鼻咽癌中的功能。采用western blot检测E-cadherin和vimentin表达情况。4.分别在si-EPC1和si-NC细胞系中加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002,通过CCK8、流式细胞和Transwell检测各组细胞的增殖、凋亡及迁移侵袭情况;再用western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达情况。5.构建斑马鱼鼻咽癌转移模型,分析EPC1在斑马鱼体内对鼻咽癌生长和转移的影响。研究结果1.GSE12452和GSE53819分别筛选到739和1756个差异基因,再利用WGCNA软件包对差异基因集进行加权共表达网络的构建,得出Brown和Magenta模块与鼻咽癌的关系密切,对上述模块中的基因进行GO功能注释分析和KEGG富集分析,结果显示高相关模块与生物调控、代谢过程、生殖、细胞增殖等功能相关。再对上述模块基因进行共表达网络构建,共筛选出3个hub基因（EPC1、GTF2H3和RARG）,上述基因可作为后续研究的候选基因。2.采用qRT-PCR检测鼻咽癌组织和细胞中EPC1表达高于正常鼻咽上皮组织和细胞（P＜0.01）。EPC1表达与TNM分期相关,Ⅲ、Ⅳ期患者EPC1的表达高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义（P=0.013）,EPC1表达与是否淋巴结转移相关,淋巴结转移（N1-3）表达高于淋巴结阴性（N0）（P=0.007）,EPC1表达与患者年龄相关,≥60岁患者EPC1的表达高于＜60岁,差异有统计学意义（P=0.014）,但EPC1表达与患者性别、是否远处转移之间无显著相关性（P值分别为0.17、0.688）。EPC1高表达组总生存、至局部复发时间均低于EPC1低表达组（P=0.0031,P=0.028）。3.CCK8、克隆形成实验结果显示,与si-NC组相比,si-EPC1抑制鼻咽癌细胞增殖（P＜0.01）;流式细胞凋亡分析显示,与si-NC组相比,EPC1沉默促进鼻咽癌细胞凋亡（P＜0.01）;Transwell实验结果显示,与si-NC组相比,si-EPC1抑制鼻咽癌细胞侵袭和迁移（P＜0.01）;Western blot结果显示,与si-NC组相比,si-EPC1组E-cadherin蛋白水平增加,vimentin表达降低（P＜0.01）,提示EPC1沉默抑制鼻咽癌EMT进程。4.细胞实验结果显示:EPC1沉默通过PI3K/AKT通路抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,促进细胞凋亡,EPC1沉默抑制PI3K/AKT通路活性。5.斑马鱼实验结果显示:EPC1沉默能够抑制斑马鱼体内鼻咽癌肿瘤细胞生长和转移,LY294002表现为增强EPC1沉默抑制鼻咽癌的生长和转移作用。研究结论1.本研究通过WGCNA筛选出与鼻咽癌发生发展密切相关的基因模块和3个hub基因（EPC1、GTF2H3和RARG）,为后续研究打下基础。2.EPC1表达在鼻咽癌中高表达,EPC1表达与鼻咽癌的预后相关,EPC1高表达预示着不良预后。3.EPC1是鼻咽癌促癌基因,干扰EPC1表达可抑制鼻咽癌的侵袭和转移。4.沉默EPC1通过PI3K/AKT信号通路抑制鼻咽癌生长和转移。