研究目的：常规苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色技术简称HE染色技术。临床患者或动物实验的组织标本通过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、摊片、贴片、烤片、染色和封片等一系列操作技术,制成一张组织切片,这是各种病理技术的基础。HE制片质量在很大程度上影响病理医师能否做出正确的病理诊断。优质的HE玻片标本：在显微镜下观察时应该达到核质清楚、红蓝分明、对比清晰。而制出大量优质的切片并非易事,在常规病理制片的过程中,经常会遇到各种原因引起的组织脱水、透明、浸蜡不足、组织切片染色灰白、组织结构不清等问题,导致染色失败,特别是胃镜活检标本、穿刺等小活检组织标本,由于组织小,一旦出现上述问题,大多都无法补材。为避免再次发生此类事件,需及时查明失败原因,积极补救和调整。在本研究中,我们通过多次试验,终于找出切片染色失败的主要原因,即脱水机处理组织不当。在此基础上,我们进行了染色失败标本补救措施的研究：①对染色灰白的原切片退掉盖玻片以后重新处理,②对组织处理不当的蜡块重新切片后处理切片后再复染。③是将处理不当的蜡块组织经二甲苯多次脱蜡,入梯度乙醇直至水化,然后将发软的组织进行重新脱水处理。研究结果表明：补救措施③基本达到病理诊断的阅片要求,但存在较大风险,稍有不慎就会导致组织变脆变硬,制片困难；而补救措施①和②则能够显著提高病理切片的质量,满足了病理诊断的要求。研究方法：1.HE染色失败原因的查找收集HE染色失败的20例病理标本,其中包括胃镜活检标本5例、肠镜活检标本5例、子宫内膜标本5例、肺穿刺标本5例。同时收集近日工作中染色正常的20例标本(胃镜活检标本蜡块5例、肠镜活检标本蜡块5例、子宫内膜标本蜡块5例、肺穿刺标本蜡块5例),以及当天免疫组织化学染色的20例HE切片进行对比观察。试验设计分为7组：HE染色失败的标本为染色失败组；染色失败的蜡块组织利用4种方法进行处理,为处理组1：切片后经调节后的染色机程序再染色(延长烤片时间)；处理组2：切片后经调节后的染色机程序再染色(更换新苏木素和伊红)；处理组3：切片后经调节后的染色机程序再染色(延长染色机中切片脱蜡和脱水时间)；处理组4：切片后经正常的染色机程序染色,再调节封片用的中性树胶浓度的玻片；同时,设立两个对照组,正常HE染色对照组：正常程序处理的石蜡标本切片经正常的染色机程序染色：免疫组化对照组：染色失败的石蜡标本经免疫组织化学染色程序后的HE切片。2.染色失败标本补救措施的研究利用上述染色失败的20个标本,将20例标本利用3种方法分别进行处理。补救组1：将染色失败的HE切片放入二甲苯中浸泡30 min,去掉覆在切片组织上的盖玻片,然后将切片移到100%、95%、85%、70%的乙醇中各3 min,切片水洗3 min。将水洗的切片放入盛300 m1蒸馏水的500 ml烧杯中进行水浴加热,将烧杯放入盛水的不锈钢锅中,用电炉或电磁炉加热,水沸腾后继续煮30 min,将烧杯冷却至室温后取出切片,将切片重新染色。补救组2：将蜡块重新切片,将组织片贴片于防脱载玻片上,65℃烤片30 min,常规脱蜡至水化,将切片放入盛自来水的不锈钢锅中水浴加热煮30 min,再进行常规HE染色。补救组3：将蜡块组织经二甲苯多次脱蜡,入梯度乙醇直至水化,然后将发软的组织进行重新处理,即对蜡块组织逆程序处理到原组织水化状态,更新试剂后再次处理。同时,以染色失败的原始标本切片作为对照组。研究结果：1.HE染色失败原因的排查与染色失败组相比,处理组1、2和4的组织染色灰白,组织结构不清,无法满足诊断要求。与原始HE切片相比,其病理评分均无明显差异(p>0.05)。处理组3的病理评分尽管与原始切片相比,在统计学上有显著性差异(p<0.05),但仍然不能满足临床病理诊断的要求。而正常HE染色对照组染色后镜下见核质清楚、红蓝分明、对比清晰,由此排除了烤片、染色机染色和封片等步骤的原因。此外,在免疫组化对照组中,染色失败玻片经免疫组织化学染色程序后HE切片染色效果基本等同于正常HE切片染色对照组。通过逐步排除,最终发现HE染色失败的原因是自动脱水过程中病理组织脱水处理不当引起的。2.补救措施效果的评价根据病理切片染色后的评分情况,本研究发现3种补救方法处理的切片染色效果均较好,镜下见切片组织结构清晰,色彩鲜艳,红蓝对比适当,透明度好,完全达到了诊断标准。同时,与原始HE切片相比,其病理评分在统计学上均有明显差异(p<0.05)。但由于补救措施③仅适用于组织块较大的标本,且存在一定风险,有可能造成组织块的损毁。而补救措施①和②在取得满意染色效果的同时,对组织标本不造成任何影响,因此我们推荐使用补救措施①和②来处理工作中出现的类似问题。主要结论：影响石蜡切片HE染色的因素贯穿于整个组织处理及染色过程中,从组织离体后的固定、脱水处理及染色过程的每个步骤均会对HE染色产生影响。标本固定及染色过程导致的染色失败问题的解决,可通过逐一排查导致染色不良的因素,采取相应的解决办法及补救措施。在本研究中,我们通过逐步筛查,发现了导致本次染色失败的根本原因是组织脱水机处理不当引起的。同时,我们利用3种不同措施对原切片和处理不当蜡块切片进行重新处理,发现了两种解决HE染色失败的补救措施,为今后临床病理工作者解决此类问题提供了科学依据。