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阿维菌素(avermectin. AVM)是一种广谱农用杀虫剂,具有良好的杀虫效果。环境中AVM的蓄积量随着AVM用量的日趋加大而不断增多,对生态环境产生了消极的影响。由于鸽子具有对环境的变化敏感性高的特点,其被认为是监测生态环境变化的首选物种之一。DNA甲基化是已知最早被发现的与基因抑制相关的表观遗传机制。在诸多重要生物学过程(例如基因表达调控、胚胎发育、细胞分化等)中,DNA甲基化都起到了关键作用。DNA异常甲基化可能导致基因的稳定性降低进而导致各种疾病的发生。农药残留可以直接或间接的导致暴露动物DNA甲基化状态的改变。环境污染物的表观遗传学效应及其机理的研究是环境毒理学研究的主要方向之一,DNA甲基化水平可能会成为评价环境残留农药毒性的一种有效的生物信号。本试验通过向王鸽饲喂日粮中添加不同剂量AVM(对照组饲喂不含AVM的全价日粮、低、中、高剂量组用药浓度分别为20mg/kg·diet、40mg/kg·diet、60mg/kg’diet)的染毒方法,复制王鸽亚慢性AVM中毒模型。在染毒后的第30d、60d、90d分别采取所需组织样品,应用高效液相色谱法检测王鸽肝脏、肾脏、脾脏、心脏组织中的DNA总甲基化水平,同时采用实时荧光定量PCR法测定AVM对上述组织DNA甲基转移酶DNMTl、DNMT3A、DNMT3B以及DNA去甲基化酶MBD2基因mRNA表达的影响,取得如下结果：1.成功建立王鸽组织中基因组DNA甲基化水平的HPLC检测方法,优化色谱条件如下：色谱柱为C18-EP (250mm×4·6mm5μm);检测波长为280nm；流动相为0.05moL·L-1KH2PO4, pH值用H3PO4调至3.5；流速为1mL/min,上样量20μL。此条件下进行色谱实验,结果显示各核苷酸之间分离良好,洗脱时间较快,因此在该色谱条件下,可以进行组织DNA总甲基化水平的检测。2.亚慢性AVM中毒引起王鸽肝脏、肾脏、心脏及脾脏DNA总甲基化水平降低,降低程度具有组织差异性。该结果说明整体DNA低甲基化是AVM对王鸽的毒性机制之一。3.亚慢性AVM中毒导致王鸽肝脏、肾脏、心脏及脾脏DNA甲基转移酶DNMT1、 DNMT3A、DNMT3B基因mRNA表达水平降低,说明DNA甲基转移酶表达水平的改变是AVM诱导DNA低甲基化的机制之一。4.亚慢性AVM中毒导致王鸽肝脏、肾脏、心脏及脾脏去甲基化酶MBD2mRNA表达水平升高,说明AVM引起的王鸽DNA低甲基化与MBD2表达水平的改变有关。根据以上结果,AVM可引起组织DNA总甲基化水平降低。DNA甲基转移酶表达水平的降低和去甲基化酶表达水平的升高可能是AVM诱导DNA总甲基化水平降低的机制,AVM引起王鸽组织DNA总甲基化水平降低是其毒性机制之一。