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目的: 乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一,也是女性癌症相关死亡的主要原因。三阴乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌一个亚型,其特征为雌激素受体阴性,孕激素受体阴性和人表皮生长因子受体2(Her2)无扩增,具有高侵袭转移性的临床特征和不良预后,目前还缺乏有效靶向治疗。因此,寻找新型分子靶向治疗方法尤为重要。 小分子核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度由20-22个核苷酸组成的内源性非编码单链小分子RNA,通过与靶信使RNA(mRNA)3'-非编码区(3'-UTR)的互补配对影响基因表达,调控各种生理及病理过程。大量文献报道miR-30a在乳腺癌表达下调,但在容易发生侵袭转移及预后差的三阴乳腺癌研究报道甚少。为评估miR-30a在三阴乳腺癌的表达、生物学功能及作用机制,本课题将从以下三个方面进行实验和探索。 方法: 1.通过实时荧光定量PCR检测miR-30a在三阴乳腺癌肿瘤组织及细胞系的表达水平;通过临床病理资料分析miR-30a的表达与三阴乳腺癌的关系;运用生物信息学公共数据库,分析miR-30a与乳腺癌预后的关系。 2.构建慢病毒感染的miR-30a稳定表达细胞系和阴性对照(miR-SCR)细胞系;通过细胞划痕实验与细胞侵袭实验分析miR-30a的表达对细胞迁移及侵袭能力的影响;采用免疫印迹及免疫荧光实验检测上皮间质转化相关的标记分子表达,研究miR-30a对上皮间质转化的影响;建立皮下移植瘤模型分析miR-30a对三阴乳腺癌细胞成瘤的影响;采用尾静脉注射方法建立三阴乳腺癌细胞的肺转移模型,分析miR-30a对肺转移瘤的影响。 3.通过miR-base,Targetscan等数据库并结合文献报道,预测miR-30a的靶基因,运用双荧光素酶报告系统验证miR-30a对靶基因表达的调控作用,探索miR-30a的作用机理。 结果: 1.miR-30a在三阴乳腺癌肿瘤组织及细胞系中表达显著下调,且miR-30a的表达下调与高组织分级和淋巴结转移相关(P<0.05)。利用生物信息数据库分析miR-30a的表达与乳腺癌预后的关系,发现miR-30a表达下调与总生存时间缩短相关(P<0.05)。 2.外源性过表达miR-30a显著抑制三阴乳腺癌细胞系(MDA-MB-231及BT549)迁移和侵袭能力。与对照组相比,外源性过表达miR-30a的三阴乳腺癌细胞上皮标志分子E-钙粘蛋白的表达上调,间质标记分子N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达下调,外源性过表达miR-30a抑制三阴乳腺癌上皮间质转化。外源性过表达miR-30a的BT549裸鼠移植瘤的体积显著(P<0.05)小于对照组肿瘤体积,肺转移结节数比对照组明显减少。 3.外源性过表达miR-30a显著降低了HEK293T细胞携带野生型ROR1-3'-UTR荧光素酶活性,而携带突变型ROR1的3'-UTR萤光素酶活性没有明显影响。同时,miR-30a互补序列增加了野生型ROR1的3'-UTR萤光素酶活性。同样,在三阴乳腺癌细胞系(MDA-MB-231和BT549),外源性过表达miR-30a显著抑制了携带野生型ROR1的3'-UTR萤光素酶活性,而携带突变型ROR1的3'-UTR萤光素酶活性并没有影响。外源性过表达miR-30a降低三阴乳腺癌细胞ROR1的表达,而过表达ROR1部分逆转了miR-30a对迁移和侵袭的抑制作用。 结论: 1.miR-30a在三阴乳腺癌组织及细胞系表达显著下调。miR-30a抑制三阴乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,抑制上皮间质转化以及抑制三阴乳腺癌移植瘤生长和肺转移。 2.ROR1为一个miR-30a的靶基因,miR-30a通过靶向调控ROR1的表达,对三阴乳腺癌的侵袭转移有重要作用。