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香蕉枯萎病,是一种毁灭性的维管束系统性真菌病害。近年来,该病害在世界各香蕉产地频繁爆发,给香蕉的生产和产业发展带来了极大的威胁。香蕉枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense, FOC),是一种土壤习居菌,借助于染病吸芽和土壤、灌溉水流动等进行传播。目前,关于香蕉与尖孢镰刀菌互作分子机制的报道还比较少,但是理解二者间的分子互作机制有助于对香蕉枯萎病的研究和防治。本研究运用cDNA-AFLP技术研究香蕉与尖孢镰刀菌的互作机理,取得了以下主要结果:1、本研究以cDNA-AFLP技术研究香蕉与尖孢镰刀菌互作中香蕉的基因差异表达。用离体叶片接种尖孢镰刀菌,以接种无菌水作为对照。分别在互作4h、24h、3d和6d后剪取接种和未接种的香蕉叶片,然后提取香蕉叶片总RNA,并将其反转录成cDNA后进行AFLP分析。cDNA-AFLP选择识别6个碱基位点的EcoRI和识别4个碱基位点的MseI对双链cDNA进行酶切,得到的两种粘性末端并且分别连接上不同的人工接头,预扩增一次后再用256对2+2选择性引物进行选择性扩增,并且在聚丙烯酰胺凝胶电泳后用碱性银染的方法染色进行指纹图谱分析。2、本研究借助于cDNA-AFLP技术,共获得222条差异表达片段。通过测序分析最终获得差异表达的137种EST序列,其中有64.96%的EST序列可推测其功能,包括12.41%的EST与基础代谢相关,5.84%的EST与能量代谢相关,2.92%的EST与蛋白质合成相关,5.11%的EST与蛋白质加工相关,13.87%的EST与转录及其调控相关,4.38%的EST与物质运输相关,2.19%的EST与细胞的生长与分裂相关,2.19%的EST与细胞结构相关,9.48%的EST与信号传导相关,6.57%的EST与疾病及防御反应相关;剩下的35.04%为功能未知的EST序列,包含24条新发现的EST序列。3、本研究获得了9种EST序列所代表的基因可能与尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种胁迫的疾病防御反应有关,包括NBS-LRR类抗性基因、热击蛋白、乙醇脱氢酶等;19种EST序列所代表的基因可能与尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种胁迫的转录调控有关,包括转录因子MYB和MYC、锌指蛋白、还原转座子、富含甘氨酸核糖核酸结合蛋白等;13种EST序列所代表的基因可能与尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种胁迫的信号传导有关,包括泛素结合酶E2等;剩余的差异片段与基础代谢、能量代谢等相关。4、本研究首次将cDNA-AFLP技术应用于香蕉与尖孢镰刀菌互作中差异表达基因研究,成功分离到与香蕉抗病相关基因差异表达片段,并通过半定量RT-PCR验证了部分结果的真实性。由于这些发生表达变化的基因很有可能参与互作的过程,所以本研究的结果有助于揭示尖孢镰刀菌侵染香蕉过程的分子机理和基因基础。