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从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中获得一段cDNA序列,通过blast比对,发现它含有一个CMC保守结构域,我们将其命名为BmCMC。CMC蛋白在真核生物细胞内普遍存在,并且高度保守,但是关于其功能研究的报道非常少。这个B.CMC基因含有2个外显子,1个内含子,ORF为35.bp,编码含有118个氨基酸残基的蛋白,称之为BmCMC,预测分子量为13.5.kDa,等电点为8.98。我们利用大肠杆菌表达系统成功表达了含有His标签的BmCMC融合蛋白,分子量合计为17.3.kDa。用HiTra.Chelatin.HP亲和层析柱纯化融合的目的蛋白,经FPLC反相柱层析进一步纯化,然后进行质谱分析,得到该融合蛋白的分子量为17.4.kDa,证实了该蛋白表达的正确性。用得到的融合目的蛋白为抗原免疫1只雄性的新西兰大白兔,制备该融合蛋白的多克隆抗体。ELISA间接法检测该抗血清(多克隆抗体)的效价可达到1:16000以上。用制备的多克隆抗体通过Wester.blotting检测发现,BmCMC蛋白仅仅在家蚕的肠和丝腺当中有表达,其他组织及各个时期没有检测到信号。荧定定量PCR的结果表明,家蚕BmCMCmRNA在家蚕的各个发育时期及不同的组织当中广泛存在,其中在家蚕的各个发育时期中蛹中的转录水平最高,五龄幼虫的转录水平最低,卵和蛾中的转录水平依次递减;以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学实验,结果显示,BmCMC蛋白主要分布在细胞质中,在细胞核内几乎不存在。这些结果必将为深入研究BmCMC蛋白奠定坚实的基础。