目的：分析1311标记的2F7抗体在荷人小细胞肺癌裸鼠体内的分布、靶向性，观察1311标记的2F7抗体对荷人小细胞肺癌裸鼠模型的生长抑制作用。意义： 小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)占全部肺癌总数的10％～25％，小细胞肺癌具有快速分裂、增殖和早期扩散等特性，且病情发展迅速，病程短，恶性程度高，预后较差。诊断时约有67％的小细胞肺癌患者有明显的远处转移。小细胞肺癌对放疗、化疗均高度敏感。然而，治疗后大部分患者将会复发。因此，目前的治疗原则是以全身化疗为主的多种方法综合治疗。 放射免疫治疗是利用放射性核素和单克隆抗体结合，借助高特异亲肿瘤的抗体为载体，放射性核素如131I通过释放β射线杀伤肿瘤细胞，不仅对与标记抗体直接结合细胞，而且对周围一定射程内未结合的肿瘤细胞都有杀伤作用。由于抗体在肿瘤组织中浓度比周围组织高，使放射性核素主要聚集在肿瘤组织内，从而降低了核素对机体的毒性，提高了疗效。 本课题通过观察131I标记的2F7抗体对荷人小细胞肺癌裸鼠模型的生长抑制作用，寻求小细胞肺癌治疗的新手段。 方法：1.荷瘤裸鼠模型的建立：将对数生长期Ⅲ28细胞制成5．0x107cells／mi的悬液。6～8周龄，体重16g～22g，♂BALB／c裸鼠16只，于右前肢内侧腋窝皮下接种细胞1．Oxl07cells／0.2ml／只。20天左右，肿瘤长至约1.5cm×1．5cm×1cmcm大小。 2.免疫组化检测H128小细胞肺癌细胞2F7抗原的表达：20天后取一只裸鼠接种的肿瘤组织用lO％福尔马林固定，石腊包埋，切片后免疫组化染色分析2F7抗原的表达情况。 3.131I标记2F7单克隆抗体的制备和检测：取2F7抗体10μg，Nal31I555MBq,氯氨T50μg，总体积200ul，PH=7.4,在室温下反应60s，加入偏重亚硫酸钠100ug终止碘化反应。对反应试剂作纸层析检测标记率，标记后反应液用SephadexG50层析柱分离纯化，用纸层析法测定其放化纯度，最后测定其比活度。 4.测定H128细胞对标记抗体的摄取率：18只培养瓶分为三组，一组装有标记抗体与H128细胞作为实验组；二组装有标记抗体与不表达2F7抗原的Molte细胞(成人T淋巴细胞白血病株)作为非特异性对照组；三组只有培养液与标记抗体为空白对照组，37℃孵箱中孵育，不同时间比较摄取率。 5.标记抗体在裸鼠体内的生物分布：取15只荷瘤裸鼠尾静脉注射131I标记2F7抗体7.4MBq后，分别在12h、24h、36h、48h、72h处死3只裸鼠，测量肿瘤、血液、肝脏、脾脏、心脏、肾脏、股骨的放射性。计算每克组织百分注射剂量率(％ID儋)，了解131I标记2F7抗体在体内的分布，并分析肿瘤组织对131I标记2F7抗体的摄取情况。 6．荷瘤裸鼠分组治疗观察：取20只荷瘤裸鼠，待裸鼠皮下肿瘤长至直径为0.5—0.7cm后随机分为四组，l组为生理盐水对照组，2组为单纯2F7抗体注射组(注射2F7抗体3μg)，3组为单纯核素注射组(注射Nal31I1.1MBq)，4组为131I标记2F7抗体注射组(注射131I标记2F7抗体1.1MBq)。分别在第l和第4天两次尾静脉注射相应试剂后继续观察生长情况，用游标卡尺每3天测量一次肿瘤最大直径(a)和最大垂直直径(b)，计算肿瘤体积，记录肿瘤生长情况。25天后处死裸鼠，测量肿瘤组织重量。对肿瘤体积大小和重量进行单因素方差分析，计算抑瘤率。 7．观察病理学改变：取治疗组和对照组肿瘤组织10％福尔马林固定，石腊包埋，切片后HE染色，观察病理学改变。 结果：1.免疫组化观察2F7抗原的表达情况：肿瘤细胞大小不一致，核分裂相多见，明显异型性，免疫组化染色细胞数>50％，细胞膜染色较浓，胞浆染色较淡，2F7抗原主要分布在细胞膜上，胞浆中也有少量表达。 2.131I标记2F7单克隆抗体的标记率：氯氨T法标记，作纸层析，测定其标记率为67．73％，SephadexG50层析柱分离纯化，纯化后的放射化学纯度为95．63％，放射性比活度为4．52MBq／μg抗体。 3．H128细胞对标记抗体的摄取率：180min实验组摄取率为22．38％，非特异性对照组摄取率为6．77％，空白对照组结合率为1．49％。实验组最后摄取率为21．66％，其摄取率明显高于非特异性对照组细胞(Molte细胞)180min摄取率(t检验t=20．53>to,05，P<0．05)，标记抗体具有很好的免疫活性与特异性。 4.131I标记2F7单克隆抗体在裸鼠体内的分布：取15只荷瘤裸鼠尾静脉注射7.4MBq标记抗体(O.1mD后36小时肿瘤的每克组织百分注射剂量率(％ID／g)最高，为11.61％，此时瘤／血比值=4.73，瘤／肝比值=7.44，瘤／脾比值=7．07，131I-2F7抗体在肿瘤组织中浓聚。 5．各组裸鼠肿瘤生长曲线及肿瘤体积比较，统计学分析：四组荷瘤裸鼠尾静脉注射相应试剂，体积为0．1ml，每3天记录肿瘤体积，观察生长情况。一、二、三组中肿瘤生长较快，四组肿瘤生长较慢，25天后测量肿瘤体积测量肿瘤体积和重量分别为一组：体积(3．431~0．667)cm3；二组：体积(2．964~0．263)cm3；三组：体积(2．674~0．897)cm3；四组：体积(0．746~0．153)cm3。并进行单因素方差分析，第四组与其他三组有明显差异(F=24.72>F005，P<0．05)，而其他三组间f检验比较P>0．05,各组体积的差别无统计学意义。说明131I标记2F7抗体有明显抑制肿瘤生长的作用，其抑瘤率为78．3％。6．各组裸鼠肿瘤重量比较，统计学分析：25天后测量肿瘤重量分别为一组：重量(6．441~1．234)g；二组：重量(5．876i0．620)g；三组：重量(5．689~1．605)g；四组：重量(1．60±0．194)g。对131I-2F7治疗组与其他三个对照组的肿瘤重量作单因素方差分析有显著差异(F=38．52>Fo.05，P<0.05)，而其他三组间两两f检验比较均P>0.05，其他三组间重量的差别无统计学意义。说明1311标记2F7抗体有明显抑制肿瘤生长的作用。 7．治疗组和对照组病理学切片比较，可见治疗组大片肿瘤细胞坏死，核浓缩、核碎裂，呈玻璃样变。而其它三组病理切片细胞核分裂相多见，明显异型性，未见大片组织坏死。 结论： 1.使用氯胺T法标记¨1I-2F7简单有效。标记率为67.73％，通过SephadexG50分离纯化以后，放化纯度为95.63％，比放射性为4.52MBq／gg。 2．131I标记2F7单克隆抗体在裸鼠体内的分布的观察中，注射试剂36小时以后，肿瘤的％ID/g为11.6l％，比其它时间高，瘤／血比值为4.73，瘤／肝比值为7．44，131I_2F7抗体主要分布在肿瘤组织中，然后依次是血>肺>脾>肝>肾>心>骨。 3.131I-2F7抗体总剂量22.2MBq，有效地抑制的肿瘤的生长，抑瘤率为78．3％。这些结果显示2F7抗体是治疗小细胞肺癌有很好的前景。