干扰素(IFNs)是一种由免疫细胞分泌的细胞因子,目前已知的干扰素有3类,IFN-γ是II型干扰素家族中唯一的成员,因其突出的免疫调节能力,又被称作免疫干扰素。虽然IFN-γ在先天和获得性免疫应答、肿瘤监测以及对抗病毒和细菌感染中发挥着重要作用,但IFN-γ的过度表达也会导致很多疾病的发生。应用抗IFN-γ抗体中和体内过多的IFN-γ,被认为是一种有效的治疗手段。然而,鼠源抗体或是人鼠嵌合抗体用于人体后,会引起机体不同程度的免疫应答,不仅影响药效,而且会产生过敏反应。因此,免疫原性较低的全人源抗体药越来越受到研究人员和医疗工作者的重视。利用转基因小鼠制备全人源抗体是一种成熟且可靠的方法,但由于其漫长的研发周期和巨额的资金投入,限制了该方法的广泛使用。于是许多研究人员将目光放在了噬菌体展示技术上,该技术是一种从大量变异体中选出目的多肽或蛋白的体外筛选技术。可利用人免疫球蛋白序列构建全人源抗体库,再以多肽或蛋白为标靶,筛选出全人源抗体。本研究以实验室自有质粒pET28a-IFN-γ为模板扩增出人IFN-γ基因全长片段,经DNA酶随机酶切得到50bp~200bp的基因片段,将基因片段连接至pComb-EcoRV载体,电转入TG1感受态细胞中,构建噬菌体基因片段肽库,文库库容量为5.1×10~6cfu/mL,随机挑选单克隆基因测序,计算文库正确率为10%。再以实验室已经获得的鼠源抗IFN-γ单克隆抗体为靶标,对噬菌体肽库进行了5轮生物淘选,利用多克隆phage ELISA检测富集效果以判定淘选效果,随后以单克隆phage ELISA结果为参考,挑选高显色值单克隆进行基因测序,最后得到4株测序结果与IFN-γ同源的单克隆,提示该4段序列为对应鼠源抗IFN-γ单克隆抗体的潜在抗原表位。综上所述,本研究为后续利用噬菌体抗体库筛选全人源抗IFN-γ单克隆抗体的研究奠定了基础。