【摘 要】
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本研究将MAGE-4基因克隆入pcDNA3.1+质粒中,之后用阳离子脂质体成功将pcDNA3.1/MAGE-4质粒导入小鼠结肠腺癌细胞CT26中,建立了表达人MAGE-4的鼠肿瘤细胞系CT26/MAGE-4。然后
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本研究将MAGE-4基因克隆入pcDNA3.1+质粒中,之后用阳离子脂质体成功将pcDNA3.1/MAGE-4质粒导入小鼠结肠腺癌细胞CT26中,建立了表达人MAGE-4的鼠肿瘤细胞系CT26/MAGE-4。然后采用两步次级克隆的方法,构建真核表达质粒pcDNA3.1/HSP70后,再将HSP70基因双酶切亚克隆入pcDNA3.1/MAGE-4载体,获得了能够同时表达两种外源基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/HSP70/MAGE-4。将该真核重组体进行BALB/c小鼠免疫,分离脾淋巴细胞。进而通过MTT法检测小鼠脾淋巴细胞对CT26/MAGE-4细胞的毒性,证明了MAGE-4与Hsp70融合DNA疫苗能够显著增强小鼠脾淋巴细胞对CT26/MAGE-4细胞的杀伤作用。又将免疫后的小鼠脾淋巴细胞与CT26/MAGE-4细胞进行混合培养,采用ELISA法检测混合培养上清中IL-2和IFN-γ的水平,以确定针对MAGE-4的T细胞反应,结果显示IL-2和IFN-γ的水平明显高于其它组。经小鼠CT26/MAGE-4肿瘤模型研究表明MAGE-4和Hsp70融合DNA重组体能明显抑制表达MAGE-4的CT26细胞的生长,显著延长小鼠的生存时间,其治疗效果好于单独肿瘤基因疫苗(pcDNA3.1/MAGE-4、pcDNA3.1/HSP70)及共注射疫苗(pcDNA3.1/MAGE-4+pcDNA3.1/HSP70)。本研究提示融合基因疫苗pcDNA3.1/HSP70/MAGE-4对表达MAGE-4的肿瘤具有良好的治疗作用,较单独肿瘤疫苗组及共注射肿瘤疫苗组效果显著增强。
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