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人体细胞存在多种蛋白降解途径，通过26S蛋白将被泛素标记的蛋白质底物降解这种细胞的自我调节方式，与许多如病毒感染、肿瘤、癌症等疾病的发生有着重要联系。其中HIV-1病毒的感染更是多年来的研究热点，然而现今使用的治疗手段仍存在各种各样的缺陷。Vif作为HIV重要的辅助因子，能够将APOBEC3G募集到CUL5E3ligase复合体上，使A3G被泛素化，并通过泛素—蛋白酶体途径将其降解。目前针对泛素蛋白酶体系统的治疗疾病的新方法迅速成为了研究热点。因此本研究目的为设计建立CUL5E3ligase体外泛素化系统，为研究该泛素化系统功能以及各组分间的相互作用，进一步探索治疗艾滋病的作用机制，有较大的现实意义。更重要的是，成功的建立起的CUL5E3ligase体外泛素化系统课作为一种工具，可通过更换底物蛋白或有相互作用的蛋白组分，研究其他蛋白之间的泛素化作用机理。因此本体系的建立也可能为多种目前没有相对有效治疗方法的疾病涉及蛋白的相互作用机制，提供一个有效的研究途径。本文主要进行两方面研究：（1）表达纯化CUL5E3ligase体外泛素化系统内所有相关蛋白。首先将该系统内蛋白的基因进行表达载体的构建，转化得到阳性单克隆后，进行重组蛋白的表达，并通过相应的亲和层析进行纯化。进一步通过FPLC分离提取高纯度蛋白。实验同时优化了系统内各蛋白纯化的方法，让原难以表达的蛋白，通过共表达被顺利纯化。（2）检测CUL5E3ligase体外泛素化系统活性。通过Western blotting对建立起的蛋白泛素化体系进行活性检测。研究体系内蛋白泛素化情况，通过控制变量法进一步验证探索Vif与A3G的泛素化机制。并通过调节体系内各蛋白比例，为后续优化该体系使之成为一种更成熟的实用性更强的体外泛素化的研究工具奠定基础。