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猪瘟病毒(CSFV)囊膜糖蛋白E<,2>是CSFV的主要保护性抗原,可诱导产生中和抗体和保护性免疫.该研究将CSFV F114株的E<,2>基因克隆进GST融合原核表达载体pGEX-4T-1的EcoRI和BamHI位点,获得重组原核表达载体pGEX-4T-E<,2>.以大肠杆菌BL21为宿主菌进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果显示,在约63kD处有一特异性条带,其分子量与由目的基因所推导的蛋白质分子量相符,推测为E<,2>与GST融合表达基因产物.将E<,2>基因克隆进杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california multiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)转移载体pAcSecG2T的EcoRI和BamHI位点,获得了带有核型多角体病毒囊膜蛋白gp67信号肽序列与GST-E<,2>融合表达杆状病毒重组转移载体pAcSecG2T-E<,2>.在脂质体的介导下,pAcSecG2T-E<,2>载体与线性化家蚕杆状病毒Bm-BacPAK6共转染家蚕培养细胞Bm-N,空斑筛选分离纯化重组病毒(Bm-BacPAK6-E<,2>).PCR检测表明所分离的重组病毒含有目的片段E<,2>基因.SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,无论是家蚕细胞,还是家蚕幼虫、蛹的血淋巴中都可以检测到一条分子量约为63kD的特异性条带,推测为外源基因的表达产物.该研究在原核细胞与家蚕杆状病毒表达系统中均成功地融合表达了CSFV F114 E<,2>基因,为进一步纯化表达的E<,2>抗原蛋白和CSFV诊断试剂的开发应用奠定了基础,为研制CSFV新型亚单位疫苗进行了有益的探索.