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【背景与目的】1984年英国科学家Pilot研究发现，小剂量红霉素可以引发胃的移行性肌电运动综合波（MMC），从而促进胃排空和小肠转运。此后就有红霉素实验性地应用于胃瘫的治疗的报道。目前多数作者认为红霉素很可能是作为胃动素受体的激动剂来发挥作用的。但是在临床实践中，我们发现胃瘫病人对红霉素的反应个体差异很大，甚至对有些病人是无效的；文献中也有类似报道。其机理尚未见任何研究报道。该研究从药物基因组学的观点出发，旨在探讨红霉素药效易感性的遗传背景。【研究内容】主要包括两部分：1． 研究与红霉素促动力药效个体差异相关的差异表达基因；2． 以红霉素可能的作用靶点胃动素受体为中心，制备该受体的抗体，研究该受体表达与红霉素疗效的关系，并初步筛选该受体基因的单核甘酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）。【方法】1． 用STZ诱导糖尿病大鼠，建立糖尿病胃瘫动物模型，通过Tc99-DTPA核素扫描观察红霉素对糖尿病胃瘫的疗效，绘制胃的液相排空曲线，测定胃半排空时间（T1/2），根据T1/2分为有效组（E组）和无效组（F组）；2． 分离E组和F组大鼠胃窦组织RNA，与受体相关基因芯片进行杂交，初步筛选上述两组大鼠胃窦组织的差异表达基因，然后行RT-PCR验证，分析红霉素的疗效与该差异表达基因的关系；3． 合成多肽，经HPLC纯化，通过双功能偶联试剂SPDP偶联大分子载体KLH，以此偶联产物作为抗原免疫新西兰大白兔，制备胃动素受体的多克隆抗体，Elisa测定滴度，用Western Blot和免疫组化技术检测该受体的表达；分析胃动素受体表达水平与红霉素作用个体差异的相关性；4． 合成引物，扩增胃动素受体基因（GPR38）的两个外显子，通过琼脂糖凝胶回收并纯化PCR扩增产物后直接测序，初步筛选胃动素受体基因的SNP位点。<WP=5>5． 数据的统计学处理：所有数据分析用t检验、配对t检验、方差分析、卡方检验（SPSS 11.0）。【结果】1． 成功建立了糖尿病胃瘫大鼠动物模型，胃瘫组大鼠（G组）的液相胃半排空时间T1/2（单位：min）较正常对照组明显延长（62±6.8 vs 30±4.5），P＜0.01；G组大鼠经红霉素治疗后T1/2明显缩短（62±6.8 vs 49±14.5），P＜0.05。以T1/2作为观测和分组指标，将其分为红霉素有效组11只（E组）和无效组9只（F组）和9只空白对照组（S组，不用红霉素组）。自身前后对照显示，E组用药后T1/2明显缩短（64±6.5 vs 36±7.3），P＜0.01；F组用药后T1/2降低不明显（60±8.4 vs 52±9.5），P＞0.05；而S组注射生理盐水后没有明显变化（62±7.8 vs 60±7.6），P＞0.05；E/F组自身前后对照T T1/2缩短值具有显著差异（28±7.5，8.0±5.2）,P＜0.01。2． 芯片杂交结果显示，10条受体相关基因在E/F组大鼠胃窦组织中存在差异表达，其中理论上可能与胃肠动力相关的两个受体基因多巴胺受体D3（DRD3）和神经肽受体Y5（NPYY5），Cy5/Cy3*比值（Ratio值）分别为0.227和0.232。对这两个基因行RT-PCR验证，取得了与基因芯片一致的结果：即D3受体的mRNA表达在E组中显著高于F组（0.26±0.04 vs 0.16±0.04），P＜0.01；而E、F组与N（0.21±0.06）、S组（0.23±0.06）没有显著差异，P＞0.05。Y5受体在E组中显著高于F组（0.94±0.10 vs 0.68±0.09），P＜0.01；而E、F组与N（0.80±0.18）、S组（0.82±0.15）没有显著差异，P＞0.05。3． 合成了胃动素受体N端17肽（SDGPEGAREPDERRKYC），氨基酸序列分析证实序列正确，HPLC纯化后成功偶联了KLH，制备了胃动素受体的多克隆抗体，滴度达1：500000，并证实此抗体具有良好的特异性。免疫组化显示胃动素受体主要在大鼠胃体、胃窦的黏膜层表达，其中以胃窦为主，而在平滑肌细胞未见表达。胃动素受体的蛋白表达水平在E组中显著高于F组（0.43±0.03 vs 0.30±0.04），P＜0.05。而E、F组与N（0.35±0.05）、S组（0.36±0.04）没有显著差异，P＞0.05。成功扩增了胃动素受体基因的两个外显子，发现第一外显子有两个SNP位点：177位碱基A/C变异；799位C/T变异，但均未改变氨基酸密码子。统<WP=6>4． 计分析显示该碱基变异和基因型分布在正常人和糖尿病人中没有差别。【结论】1． 红霉素能够显著改善糖尿病胃瘫大鼠的胃排空，但有显著的个体差异。2． DRD3和NPYY5受体可能与红霉素促动力药效的易感性密切相关，并有可能参与了胃肠动力的调节。3． 胃动素受体主要表达在大鼠胃体、胃窦的黏膜层，其中以胃窦为主。其表达水平与红霉素疗效密切相关。是胃动素受体作为红霉素促动力作用靶点的又一佐证。4． 胃动素受体基因（GPR38）第一外显子177位碱基存在A/C变异；第一外显子799位存在C/T变异，均未改变氨基酸编码。提示红霉素促动力作用的易感性与胃动素受体基因的单核甘酸多态性可能没有关系。