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近年来随着养殖业的需要,乌鳢(Channa argu)逐渐成为国内的特种养殖品种。为提高乌鳢子代雄性率及开展乌鳢的单性养殖,本研究采用RT-PCR和RACE的方法克隆出了乌鳢的Dmrt1基因和Dmrt4的部分基因,并对Dmrt1的表达特性进行了具体的分析,这将有助于了解乌鳢的性别决定机制。Dmrt基因是涉及到性别决定和分化的保守基因家族,它广泛存在于不同物种中。本研究通过使用简并引物从乌鳢的基因组DNA中获得了Dmrt1的保守域DM1及Dmrt4的保守域DM4,对DM结构域进行测序,通过比对确定为Dmrt基因的保守域。根据获得的保守域序列,设计3’RACE和5’RACE的引物,采用RACE的方法扩增Dmrt的全长cDNA。在乌鳢的精巢组织克隆得到乌鳢Dmrt1基因的cDNA序列,并采用半定量和定量的手段对Dmrt1mRNA在乌鳢成鱼中不同组织的表达差异进行分析。研究获得的乌鳢Dmrt1基因cDNA全长为1573bp,5’端非翻译区25bp,编码266个氨基酸的800bp的开放阅读框,747bp含有脊椎动物典型的多腺苷酸化加尾信号AATAAA的3’端非翻译区。通过对氨基酸序列的同源性进行分析表明,乌鳢Dmrt1基因与多种鱼类相似度较高,与其他类动物相似度较低。氨基酸序列与银鳕鱼、黑棘鲷等鱼类同源性较高,并与之共同聚为鱼类的Dmrt1分支。RT-PCR和实时定量结果均表明Dmrt1在雌雄乌鳢的10个样品中,在精巢中表达量最高,相对较弱地在卵巢中表达,在其余组织中Dmrt1基因的表达量很少。以上实验结果表明,Dmrt1基因可能跟性腺及生殖细胞的发育有关联。在乌鳢的卵巢组织中克隆出了乌鳢的Dmrt4基因的部分序列。Dmrt4基因通过5’端扩增,并分别得到192bp的特异性条带。经过与保守域DM4进行拼接,已经得到332bp的片段。对保守域DM4进行分析,可以看出虽然碱基序列有较大差异,但是编码的氨基酸序列相似度非常高。我们可以看到,Dmrt4的进化是高度保守的,表明此基因在性别分化和功能的维持上可以发挥重要作用。