中国南海海绵共生微生物的宏基因组研究

来源 :中国科学院研究生院(海洋研究所) | 被引量 : 1次 | 上传用户:qixiannu
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海绵动物是原始、低等滤食的后生动物,它的外形能随着生活环境的变化而改变,长期以来海绵的分类问题存在较大争议。传统的海绵分类是根据海绵的骨针或骨骼来鉴定的,骨针形状完全不同的海绵很容易分类。但是有些骨针的形状相似,但是弯曲程度和长度都有细微的变化,此时,单靠骨针来分类已不可靠。通过应用生物分子标签技术(Barcode),可以为海绵的的分类提供了可靠的依据。利用16S rDNA克隆文库构建技术,克隆六种海绵共生微生物的16S基因片段,并将其六种海绵的细菌文库相应编号为:PBS2、PBS4、PBS5、PBS7、PBS8和PBS10,克隆数分别为240、203、288、288、288、288。用限制性内切酶MboI和BstUI对PBS2和PBS4片段进行RFLP分析,克隆文库相应的OTU为:29和21。挑选.代表性的克隆进行测序,并利用NCBI和RDP数据库进行细菌种属分析。PBS2文库主要由五大细菌门类,分别是:Actinobacteria(23个克隆,9.58%)Bacteroidetes(23个克隆,5.42%)、Firmicutes(1个克隆,0.42%)、Proteobacteria(62个克隆,25.83%)、 Cyanobacteria(137个克隆,57.08%)、未分类的细菌有4个克隆,占总克隆数的1.67%。PBS4文库共有203个克隆,主要由四大细菌门类,分别是:Actinobacteria(3个克隆,1.48%)Bacteroidetes(3个克隆,1.48%)、Proteobacteria(164个克隆,80.79%)、 Cyanobacteria(9个克隆,4.43%)、未能分类的细菌有24个克隆,占总克隆数的11.82%。利用宏基因组和16S rDNA文库技术,对京一海绵进行研究。京一海绵的16SrDNA基因文库共得到244个克隆,15个OTU,主要由Actinobacteria、Planctomycetes、 Proteobacteria、 Cyanobacteria共四个细菌门类组成,其中Cyanobacteria的细菌门类多达91.39%,而Actinobacteria和Planctomycetes的门类低至0.41%,Proteobacteria门类为6.56%,没有明确分类的细菌门类为1.23%。京一海绵样品的宏基因组solexa测序得到原始数据约20G,拼接得到346749个contigs,约73.52M的非冗余数据,片段的平均长度为约212bp,最长的片段为27.73kb,最短的片段为100bp。其中,65.09%的congtigs片段分布在100-149bp之间,14.69%的片段分布在150-199bp,200bp以上的片段占20.22%。这346749个片段根据RDP16S classifier分析,共176个contigs属于Archaea,占总体contigs数目的0.05%;227021个片段属于Bacteria,占总体contigs数目的65.47%;没有明确分类的片段大约有119553个,占总体contigs数目的34.48%。在176个属于Archaea的contigs中,有32个contigs属于Crenarchaeota;剩余的没有明确分类;227021个Bacteria的contigs中,15个contigs属于Actinobacteria,1个属于Bacteroidetes,937个属于Firmicutes,5个属于Planctomycetes,10个属于Proteobacteria,9个属于Cyanobacteria。
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