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目的探讨miR-1247-3p对脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IS/R)中脑神经细胞凋亡的影响,并阐明miR-1247-3p调控神经细胞凋亡的上下游分子机制。方法建立小鼠大脑中动脉阻塞模型(cerebral middle artery occlusion,MCAO)缺血1 h/再灌注0 h、6 h、12 h、24 h及N2a细胞氧糖剥夺3 h/复氧复糖(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)0 h、6 h、12 h、24 h损伤模型,观察miR-1247-3p表达的变化;在此基础上,侧脑室注射LV-miR-1247-3p慢病毒7天以及转染25 nM miR-1247-3p mimic 48 h,观察过表达miR-1247-3p后,对神经细胞凋亡的影响。并用20?M Caspase-2抑制剂Z-VDVAD-FMK处理N2a细胞,观察其机制是否与调控caspase-2表达有关;在此基础上,转染MRTF-A过表达质粒至N2a细胞,观察过表达MRTF-A对miR-1247-3p调控神经细胞凋亡的影响。在上述研究中,采用TTC染色和行为学评分判断大脑损伤的严重程度,TUNEL染色和cleaved caspase-3蛋白水平检测脑缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡。RT-PCR检测miR-1247-3p和miR-1247的RNA水平,western blot检测MRTF-A、cleaved caspase-3、caspase-2蛋白水平。结果在脑缺血再灌注小鼠模型中,我们检测到小鼠脑组织中miR-1247-3p水平下调,并且在再灌注24 h时显著降低(P<0.01),同时,在OGD/R诱导的N2a细胞中,miR-1247-3p的表达也下调,且在再灌注24 h表达最低(P<0.001)。而过表达miR-1247-3p后,与LV-NEG+IS 1 h/R 24 h组相比,LV-miR-1247-3p+IS 1h/R 24h组小鼠行为学评分下降(P<0.05)、脑梗死面积减少(P<0.01),细胞凋亡率也降低(P<0.001)。在N2a细胞中,给予miR-1247-3p mimic之后,与NEG-mimic+OGD 3 h/R 24 h组相比,miR-1247-3p mimic+OGD3 h/R 24 h组细胞凋亡率也降低(P<0.001),表明miR-1247-3p可抑制脑缺血再灌注损伤诱导的脑神经凋亡。为了验证miR-1247-3p的调控机制,我们通过数据库TargetScanVert发现Caspase-2可能是miR-1247-3p的靶蛋白。结果显示,在脑缺血再灌注损伤的体内外模型中,模型组Caspase-2蛋白水平上调(P<0.001),而过表达miR-1247-3p可以降低caspase-2蛋白水平(P<0.01)。用20?M的caspase-2抑制剂Z-VDVAD-FMK处理N2a细胞,结果发现,与OGD 3h/R24h组相比,Z-VDVAD-FMK降低了OGD/R模型中细胞凋亡率(P<0.001)。同时,Z-VDVAD-FMK降低了miR-1247-3p inhibitor诱导的N2a细胞凋亡(P<0.05)。生物信息学分析发现,miR-1247-3p的上游启动子区有一个CArG box。RT-PCR结果显示,过表达MRTF-A之后,miR-1247-3p的mRNA水平上调(P<0.001),并且过表达MRTF-A可以反转OGD 3 h/R 24 h所诱导的miR-1247-3p的下调(P<0.05)。同时,过表达MRTF-A之后,miR-1247的水平也上调(P<0.001),而OGD/R模型中,miR-1247水平下降(P<0.05),而过表达MRTF-A也可以翻转OGD/R模型中miR-1247的水平(P<0.01)。TUNEL染色和cleaved caspase-3蛋白水平也显示,过表达MRTF-A可以降低OGD/R模型的细胞凋亡(P<0.001),而转染miR-1247-3p inhibitor,则阻断了MRTF-A对OGD/R模型中细胞凋亡的保护作用(P<0.001)。结论miR-1247-3p能抑制脑缺血再灌注损伤诱导的脑神经细胞凋亡,其机制可能是通过MRTF-A-miR-1247-3p-caspase-2信号通路来调控。