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目的正常成年人的椎间盘组织含有很少的血管,而且只存在于纤维环的外部,然而在突出的椎间盘组织内则出现了大量的新生的毛细血管。基质细胞源性生长因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)在人类出生后成人组织内的血管发生的启发过程中起到了非常重要的作用,但在椎间盘中的表达未见报道。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种重要的血管形成刺激因子。本实验通过链霉亲和素-卵白素-生物素复合物(Strept Avidin-Biotin Complex,SABC)免疫组织化学方法测定SDF-1α和VEGF在人类椎间盘组织内的表达情况,以探讨SDF-1α和VEGF在椎间盘内血管新生中所起到的重要作用,为椎间盘退变的生物学治疗和干预奠定了理论基础。实验材料和方法1、主要试剂及仪器试剂:SDF-1α多克隆抗体、VEGF多克隆抗体(Dako,Denmark)、链霉亲和素-卵白素-生物素复合物法(SABC)免疫组化即用型试剂盒及DAB(二氨基联苯胺)显色剂(Santa,CA,USA);胃蛋白酶(Sigma,Sterinheim,Germany),二甲苯,3%过氧化氢,各浓度梯度酒精等。仪器:Leitz1512型切片机(Leitz,German);BX60F/PM30-3型显微照相系统(Olympus,Japan);Metamorph(NIC,USA)/DP10/BX51(Olympus,Japan)彩色病理图文分析系统:电子天平;微量移液器。2、实验取材及实验分组随机选取中国医科大学盛京医院2005-2007年收治的腰椎间盘手术切除标本,取出髓核组织,同时将结构不清楚和保存不良的的标本剔除。共27份标本,患者共25例(其中2例取自不同2个椎间隙标本),男14例,女11例,年龄17-69岁,平均43.8岁。根据术中所见及MRI和CT显示将其分组。一般组(纤维环未完全破裂,n=11):包括膨出型,凸出型和突出型。严重组(纤维环已完全破裂,n=9):包括脱出型和游离型。对照组(相对正常的腰椎间盘标本,n=7)来自脊柱外伤而无椎间盘突出标本。3、实验方法、检测指标①常规HE染色进行形态学观察。②免疫组织化学染色法(SABC法)检测SDF-1α、VEGF的在腰椎间盘中的表达情况。4、结果判定观察腰椎间盘髓核中SDF-1α和VEGF的表达。SDF-1α和VEGF均定位于细胞胞浆内,阳性结果为髓核细胞胞浆内出现棕黄色颗粒。在10×10倍光镜下,记录阳性细胞率,阳性细胞率=10个视野内阳性细胞总数/10个视野内细胞总数×100%。5、数据分析所有数据采用SPSS13.0统计软件处理,非参数Mann-whitney U-test检验被用作组间阳性率差异性比较,Spearman相关系数被用来检验SDF-1α和VEGF相关性。以P≤0.05作为有统计意义的检验水准。实验结果在各组的椎间盘髓核组织中SDF-1α和VEGF染色均有阳性表达。但SDF-1α和VEGF在严重组中的表达均高于一般组,一般组高于对照组,且SDF-1α和VEGF组间差异均有显著性意义(P＜0.01)。Spearman相关系数为0.74,SDF-1α和VEGF的表达有阳性相关(P＜0.01)。结论1、腰椎间盘组织内有SDF-1α和VEGF的表达且随着不同病理类型的改变而变化。2、腰椎间盘组织内SDF-1α和VEGF在椎间盘组织内呈阳性相关,两者互相调节,可能在椎间盘组织中新生血管形成的过程中起到重要的作用。