马立克病(Marek’s Disease,MD)是由马立克病病毒(Marek’s DiseaseVirus,MDV)感染鸡引起的一种高度接触性、传染性、淋巴组织增生性疾病,MD可引起免疫抑制并增加其他疾病易感性,给世界家禽业造成了巨大的经济损失。MDV主要以直径约85~100 nm的六角形无囊膜裸病毒粒子存在于细胞中,是具有严格地细胞结合性的α疱疹病毒,完整的病毒粒子具有囊膜,径约为273~400nm,不具有细胞结合性,可脱离细胞独立生存,这是该病持续传播并爆发的主要原因。本研究通过纯化鸡胚成纤维细胞(CEF)培养的MDV超强毒株GX0101作为免疫原,制备特异识别MDV的单克隆抗体。GX0101感染CEF,96h后收集细胞,10mLPBS重悬,反复冻融3次,选用100kD的切向流超滤离心管浓缩得到峰尖病毒浓缩液至5mL,病毒浓缩液经0.22μL滤膜过滤后,通过Sepharose 4 Fast Flow(4FF)凝胶作为层析介质分离纯化病毒粒子,聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析不同收集峰MDV病毒含量,并经过透射电子显微镜(TEM)观察到直径约100nm的MDV裸病毒粒子。进一步选用100kD的切向流超滤离心管浓缩得到峰尖病毒浓缩液,以此免疫Balb/c雌性小鼠制备单克隆抗体。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和Western blot筛选,最终获得107株阳性克隆,其中1株强阳性单抗杂交瘤细胞株10B2制备的单抗腹水IPMA效价为1:2.56×10~6。本研究结果为后续MDV单抗的筛选、鉴定、制备及诊断试剂研发奠定了重要基础。MEQ蛋白作为MDV最有研究价值的致癌蛋白,在MDV致癌机制研究中至关重要,本研究通过pET-30a载体表达MEQ蛋白,Rosetta菌体中表达MEQ蛋白,最终蛋白多在上清中为可溶性表达,采用镍柱亲和层析纯化后,最终得到MEQ蛋白,为MEQ单抗的制备奠定了基础。