研究背景:卵巢癌(ovarian cancer)是女性常见的生殖系统恶性肿瘤,其发病率高,恶性程度高,死亡率高,癌灶呈浸润性生长,转移迅速,对药物治疗反应差,约有70%病人在做出诊断时已属晚期。近年来的临床研究发现,在人体内VEGF受体与VEGF分子的相互作用同肿瘤高淋巴转移的特性密切相关。为此许多学者提出VEGF受体极具抗卵巢癌治疗的潜在靶点。血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)属于VEGF酪氨酸激酶受体家族成员,主要表达于淋巴管内皮细胞。VEGFR3与配体结合,激活VEGFR3诱导淋巴管的生长,一系列研究证实VEGFR3特异性表达于肿瘤新生淋巴管内皮细胞。目的:本研究以VEGFR3胞外区蛋白为靶分子,运用噬菌体展示技术筛选与受体具有高亲和性能的多肽,为靶向治疗药物的开发,提供理论依据。研究方法及结果:研究运用噬菌体展示技术,从随机十二肽库(Ph.D.-12TM)中筛选与VEGFR3胞外区特异性结合的多肽,经过四轮筛选,达到多肽的富集。随机挑选富集多肽单克隆进行扩增后,ELISA法鉴定与VEGFR3胞外区蛋白结合的特异性,共得到8个阳性克隆。对8个阳性克隆,进行DNA的抽提,凝胶电泳鉴定抽提效果,并对克隆DNA进行测序共得到3种不同的多肽DNA插入序列,DNAstar软件翻译为肽Ⅰ(WHGSLKQNLWWY);肽Ⅱ(WHWNAWALPTHG);肽Ⅲ(WHWLPNLRHYAS)。采用DNAstar、ExPASy、ClustalW软件对插入多肽序列进行分析,同时与VEGFR3原始配体VEGF-C、VEGF-D功能区进行对比,结合蛋白质二级结构特点,预测肽C (SHSWHWLPNLRHYAS)与VEGFR3胞外区蛋白具有较高的亲和能力。非竞争性ELISA法(Beatty法)测定不同多肽融合噬菌体单克隆与VEGFR3胞外区蛋白结合的功能性亲和常数,结果表明三种融合噬菌体与靶蛋白亲和能力比为16.4:9.2:174.8,证明肽Ⅲ融合噬菌体与VEGFR3胞外区具有较强的结合能力,结果与序列分析的预测相符。竞争性ELISA法鉴定肽(SHSWHWLPNLRHYAS)、VEGF-D分子与VEGFR3胞外区具有竞争性结合的关系,表明两者具有共同的结合位点,即VEGFR3分子的表位。固项结合法合成多肽(SHSWHWLPNLRHYAS)及多肽(WHGSLKQNLWWY)。