目的:核磷蛋白1（Nucleophosmin1,NPM1）是一种含量丰富的核仁磷酸化蛋白,具有广泛的生物学功能,如参与核糖体RNA的加工,胚胎发育,对压力的刺激反应等。近年来研究发现,NPM1不仅在卵巢癌、前列腺癌等许多实体瘤中呈现过表达状态,也是造血肿瘤中最常见的基因改变靶点之一,因此对NPM1生物医学领域的研究成为近年来较为关注的一个热点。进一步阐明NPM1的生物学功能及调控机制有助于了解疾病的发生发展过程,是改善肿瘤治疗效果的一个关键突破口,具有深远的临床意义。关于NPM1功能方面的研究已经被报道,但对于NPM1在分裂期主要的生物学功能仍未被解析。因此,为了发现调控NPM1的其他基因及小分子化合物,寻找在分裂期潜在的调控方式及机制,本研究应用CRISPR/Cas9基因编辑技术在内源NPM1基因位点敲入Stag-Flag标签,构建成稳定表达NPM1-Stag-Flag融合蛋白的细胞株,并通过Stag-Flag串联亲和纯化实验,进行质谱分析寻找在分裂期的特异性结合分子,为进一步解析NPM1在分裂期参与的生物学功能和了解肿瘤的发生发展过程奠定基础。研究方法:1.稳定表达NPM1融合蛋白细胞株的构建本研究结合CRISPR/Cas9基因编辑技术并利用同源重组机制分别在内源NPM1 N端（起始密码子前）和C端（终止密码子前）敲入编码Stag-Flag序列,通过药物筛选分离,并进一步应用生物化学、分子生物学方法鉴定单克隆细胞株。2.质谱分析NPM1在分裂期结合分子本研究采用细胞周期同步化的方式,将处于分裂期细胞进行免疫共沉淀。应用生物化学和质谱分析结合的方法检测NPM1在分裂期的特异性结合分子。结果:1.成功建立了两种纯合型敲入Stag-Flag的人T淋巴瘤Jurkat E6-1细胞株。2.在C-端插入Stag-Flag标签的NPM1表达效率明显优于N-端插入型3.通过质谱分析筛选到26个与分裂期NPM1相互作用的蛋白,包括参与细胞周期调控的CDK1、CDK6,与细胞增殖相关的NUDC、NAP1L1、MKI67、HSPA9,与糖代谢途径相关发的PGK1、GPI,与蛋白合成有关的FRG1、DAZAP1、RPS21等。结论:1.NPM1与细胞内的CDK1、CDK6、NUDC、NAP1L1、MKI67、HSPA9等蛋白相互作用,提示在分裂期NPM1可能参与糖酵解,分子伴侣,细胞周期调控,细胞增殖等多种生理过程。2.内源表达NPM1-Stag-Flag的Jurkat E6-1细胞株是寻找未知NPM1互作分子和开展功能研究的有力工具。