毛白杨PtlabA-likel和PtPCP-like基因克隆与表达及其在烟草和毛白杨中的转化分析

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毛白杨(Populus tomentosa Carr.)是优良的绿化和用材树种,但一直存在育种周期长和开花影响环境等问题。本文通过对毛白杨花发育相关基因的研究,利用滤纸吸附噬菌体-PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆PtlabA-likel基因和PtPCP-like基因cDNA全长序列,测序结果表明,PtlabA-likel基因序列全长1769 bp,5-UTR长259 bp,3-UTR长277 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码411个氨基酸。PtPCP-like基因序列全长595 bp,5-UTR长83 bp,3-UTR长239 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码91个氨基酸。在Conserved Domains Database(CDD)中对PtlabA-likel基因氨基酸保守结构域进行分析,发现其包含一个LabA-like superfamily结构域,故将其命名为Ptlabd-likel。经BLAST分析,在毛果杨基因组数据库中检索到含有该保守结构域的其他9个家族成员。运用BioEdit和MEGA3.1软件,绘制了该基因家族表达蛋白的系统进化树。通过RT-PCR分析,揭示了Ptlabd-likel基因及其他家族成员和PtPCP-libe基因在毛白杨中的组织差异表达模式。PtlabA-likel基因及其他家族成员,除PtlabA-like8基因只在根部表达,且表达丰度较低外,PtlabA-libel基因及其他8个家族成员都能在雄花芽中表达,但是不同基因的表达丰度以及表达部位存在一定的差异。特别是PtlabA-likel基因在毛白杨的茎、成熟叶、幼叶以及雌花芽、雄花芽均有表达,且表达丰度很高,但是在根部未见表达。PtPCP-like基因除雌花芽部位,在根、茎、成熟叶、幼叶以及雄花芽中均有表达,在根和雄花芽中表达丰度较高。为进一步研究两个基因的功能,构建了Ptlabd-likel基因和PtPCP-like基因的正义表达载体,通过根癌农杆菌介导转化,分别得到PtlabA-likel基因和PtPCP-like基因的转基因烟草和转基因毛白杨株系,通过对转基因株系进行PCR检测和毛白杨转基因株系的荧光定量分析,为Ptlabd-likel基因和PtPCP-like基因功能的深入研究奠定了基础。
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