MicroRNA调控鼻咽癌hTERT基因表达的实验研究

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目的:观察microRNA(miRNA)对鼻咽癌细胞株的端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达及其增殖和凋亡的影响,为鼻咽癌的基因治疗奠定一定的基础。材料与方法:利用体外已构建好的靶向hTERT基因的miRNA表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT转染鼻咽癌CNE-2细胞,建立稳定表达该质粒的细胞系,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western Blotting方法分别检测转染细胞中hTERT基因的mRNA水平及观察miRNA干扰后hTERT蛋白表达水平,并通过CCK-8比色法和流式细胞术分别检测靶向hTERT基因的miRNA对鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响。结果:靶向hTERT基因的miRNA表达质粒在鼻咽癌CNE-2细胞中稳定表达靶向hTERT基因的miRNA的质粒后,CNE-2细胞的hTERT基因mRNA水平下调72.8%;hTERT基因的蛋白表达水平下调75.5%;细胞增殖受到抑制,72h细胞增殖抑制率达51.1%;细胞凋亡增多,凋亡率达46.1%。结论:(1)靶向hTERT基因的miRNA质粒在体外能成功转染鼻咽癌CNE-2细胞并稳定表达。(2)靶向hTERT基因的miRNA质粒转染鼻咽癌CNE-2细胞后能下调hTERT基因mRNA和蛋白表达水平。(3)靶向hTERT基因的miRNA可在鼻咽癌中发挥RNA干扰效应,抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌基因治疗奠定一定的基础。
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