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脊髓损伤是人类致残率最高的疾患之一。随着实验性脊髓修复研究的不断进展,已可使损伤脊髓获得一定程度的再生与功能的重建。神经运动系统从大脑皮层运动区到运动器官骨骼肌是一个相互联系的整体,神经肌肉间的突触联系-神经肌肉接头作为神经系统与运动器官的链接点,更是发挥着至关重要的作用,所以神经系统损伤修复后运动功能的恢复依赖于运动终板结构的保存及其生理功能的恢复,运动终板的病理变化和功能与治疗效果密切相关。近年研究已证实脊髓损伤后,靶肌肉运动终板亦发生退行性改变,而运动终板的变化对于脊髓修复的时机选择及预后具有重要的影响。由于外周神经环路是由脊髓神经元、神经干、外周靶器官三者组成的统一整体,上运动神经元损伤后虽然外周神经环路仍旧保持其结构的完整性,但已有研究证实运动终板仍旧发生退行性改变。那么中枢神经元必然具有维持外周神经环路、靶肌肉形态、发挥运动终板功能的重要作用。
在这里,通过对运动终板一般形态、超微结构及终板酶活性长时程(至术后12月)变化的研究,我们证明:脊髓损伤后神经肌肉接头发生不可逆性退行性改变,这主要体现于接头超微结构水平,脊髓重建管移植修复,可以稳定神经肌肉接头的超微结构及酶活性。同时考虑到不同类型的肌纤维其运动终板变化情况亦有差异,在这里我们分别研究了比目鱼肌和趾长伸肌,对不同类型肌纤维神经肌肉接头的超微结构变化及胆碱酯酶活性进行对比研究。
我们将110只成年Wistar大鼠随机分为脊髓T8单纯损伤组(Cx组)、脊髓T8损伤+壳聚糖导管移植修复组(CxTp组)和正常对照组(Co组),术后2周、4周、3月、6月、12 月经心灌注固定后将大鼠后肢腓肠肌、比目鱼肌(SOL)和趾长伸肌(EDL)取出,分别用氯化金染色(压片法)观察运动终板一般形态、Karnovsky-Roots 直接法染色检测终板区 AChE 活性、透射电子显微镜观察神经肌肉接头超微结构变化情况。
研究发现,脊髓T8节段横断性损伤 2 周、4周运动终板一般形态及胆碱酯酶活性未发生明显改变,但不同类型肌纤维神经肌肉接头超微结构均发生明显的可塑性调节,如神经终末囊泡数量显著增加、突触皱褶加深且复杂程度增加,突触前线粒体均变性水肿,而肌纤维线粒体未见变性,CxTp 组的以上可塑性改变优于 Cx 组,且快肌(EDL)变化程度高于慢肌(SOL)。3月后,Cx 组不同类型肌纤维神经肌肉接头均发生显著的退行性改变,如活性区囊泡密度降低,突触前膜囊泡释放点几乎不可辨,突触皱褶显著变浅且数量明显减少,氯化金染色见终板边缘皱缩明显,损伤6月,氯化金染色显示终板区域泛化,着色模糊,超微结构显示突触前成分退变消失,仅保留次级突触间隙或突触结构保留,但突触前有大量 NF 蓄积,囊泡高度密集,同时 AChE 活性显著降低,肌纤维线粒体广泛气球样水肿变性,至损伤12月虽然氯化金染色终板阳性,但快肌与慢肌均已无典型的超微结构可以辨认,肌纤维萎缩严重,结缔组织增生。而CxTp组运动终板基本维持在稳定的状态,至移植后12月快肌纤维与慢肌纤维均可见典型而清晰的突触超微结构,肌纤维线粒体恢复至正常状态,无水肿变性,AChE活性恢复至正常水平或以上。
我们研究证实大鼠脊髓T8节段损伤后,即失去上运动神经元支配后,虽然下运动神经元及其神经环路具有自身的结构完整性,下肢骨骼肌神经肌肉接头仍然发生退行性改变,然而,应用壳聚糖导管诱导脊髓再生修复后,可以阻挡神经肌肉接头以上的退行性改变,并朝着有利于加强神经与肌肉功能联系的方向进行着形态与功能的重塑。