性病病原体低密度基因芯片的初步研制

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目的 采用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交技术研制性病病原体低密度基因芯片。 方法 将淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、白色念珠菌以及人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)SF2株env基因的种特异性探针加尾后固定在尼龙膜上。将上述5种性病病原体的标准菌株提取DNA后采用细菌、真菌以及人类免疫缺陷病毒三组通用引物分别行PCR扩增,在扩增过程中用Bio-16-dUTP标记扩增产物,将上述扩增产物变性后分别与点有5种探针的尼龙膜反向杂交;将来源于临床的性病病原体标本提取DNA后与上述三组通用引物在一个PCR反应体系内行PCR扩增,扩增过程中用Bio-16-dUTP标记扩增产物,扩增产物变性后与点有5种探针的尼龙膜反向杂交。 结果 对淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体的标准菌株行PCR扩增,均出现520bp长度的DNA片段,对白色念珠菌标准菌株行PCR扩增出现350bp的条带,对HIV-1SF2株env基因行PCR扩增出现167bp长度的DNA片段,敏感性试验可检出20fg的菌体DNA;5种性病病原体的PCR扩增产物,与膜上点有5种探针的尼龙膜杂交,结果在各自特异性探针的位置上出现杂交斑点;对临床来源的标本行PCR扩增,扩增结果显示均含有该性病病原体的目的条带,反向杂交结果显示5种探针只与其对应的DNA杂交,而不和其他菌杂交。 结论 低密度基因芯片具有特异性、敏感性等优点,采用低密度基因芯片一次杂交就可同时筛选鉴定多种性传播疾病(STDs)病原体的感染,值得临床推广应用。
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