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光是视觉系统进化以及发育的动力,视网膜是形成视觉的重要组织,外界光线只有到达正常功能的视网膜才能形成视觉。任何光线的强度、光照时间等超过了视网膜的承受力都会造成视网膜光损伤。
本实验通过对光损伤大鼠行腹腔内注射氧自由基清除剂依达拉奉,观察光照后不同时间视网膜组织病理学改变,检测光损伤后视网膜组织内氧自由基的表达,探讨视网膜光损伤的发生机制以及氧自由基清除剂依达拉奉对光损伤视网膜的保护作用,为临床治疗提供理论依据。
我们选用的实验动物为SD大鼠(雌雄不限,7-10周龄,体重220±20g)随机分成四组。Ⅰ组:正常对照组(n=32);Ⅱ组:光损伤组(n=32);Ⅲ组:生理盐水+光损伤组(n=32);Ⅳ组:依达拉奉+光损伤组(n=32)。分别于光照后0.5、1、6、10d各时相点取八只动物。
实验前所有大鼠均在12h明(120±10lux)12h暗的循环光环境下饲养7d。暗适应36h后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ三组乙醚吸入麻醉,散瞳,缝线开睑。待大鼠清醒后放入自制光照箱中(光照度13260±440lux)照射2h。光照前3dⅢ组大鼠每天腹腔注射生理盐水3mg/kg一次,Ⅳ组大鼠每天腹腔注射依达拉奉3mg/kg一次。分别于光照后0.5、1、6、10d处死大鼠摘取眼球视网膜组织。右眼的视网膜组织行HE以及TUNEL(终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位末端缺口标记法,TDT-mediated dUTP nick-end labeling method,TUNEL)法染色,光镜下观察组织细胞病理学改变,分析视网膜外核层(out nuclear layer,ONL)厚度变化,检测视网膜外核层凋亡细胞数(用凋亡指数表示)。左眼的视网膜组织分别应用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。通过以上研究方法来探讨视网膜光损伤的发生机制,了解氧自由基与视网膜光损伤的关系。
实验研究结果可见以下改变(1)视网膜组织形态学结果:Ⅰ组大鼠视网膜组织形态正常,结构层次分明,内外节排列规整,分界清晰;Ⅱ组和Ⅲ组大鼠视网膜外核层随时间延长逐渐变薄,内外节肿胀,核碎裂,排列紊乱,TUNEL染色可见较多阳性感光细胞核,在1d时较为明显;Ⅳ组与Ⅲ组视网膜组织在对应时间点相比较可见感光细胞核排列较为紧密,内外节结构较为完整、清楚,视网膜色素上皮细胞与感光细胞的外节衔接较好。(2)视网膜外核层厚度检测:Ⅰ组视网膜外核层厚度最厚,组内各时相点统计差别无显著性意义(P>0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组视网膜外核层厚度随光照后时间延长逐渐变薄,组内各时相比较均有显著性意义(P<0.05).两组间比较无统计学差别。Ⅳ组外核层厚度随时间变化亦呈逐渐变薄的趋势,各时相点与Ⅲ组的比较有统计学意义(P<0.05).(3)凋亡细胞检测:Ⅰ组视网膜外核层偶可见被TUNEL染色法标记的阳性凋亡细胞核;Ⅱ组和Ⅲ组在光照后1d凋亡细胞核染色阳性最多,凋亡指数最高,6d时明显减少。组间各时相无明显差异(P>0.05)。Ⅳ组各时相凋亡指数均小于Ⅱ组和Ⅲ组,差异有显著性意义。(4)视网膜组织中MDA含量和SOD浓度的变化:Ⅱ组和Ⅲ组视网膜光损伤后MDA浓度在第1d时最高(P<0.01),之后有所降低;SOD活性明显降低,在第1d最低(P<0.01),之后有所升高,两组间无明显差异;Ⅳ组MDA浓度在光损伤后0.5、1d和6d明显低于Ⅲ组,但是高于正常对照组,SOD活性各时相均明显高于Ⅲ组而低于正常对照组,组间指标比较差异均有显著性意义(P<0.01)。
通过该实验研究我们认为光照引起的视网膜损伤是一种细胞凋亡的改变,视网膜光损伤与氧自由基及脂质过氧化有关,依达拉奉作为氧自由基清除剂对大鼠视网膜光损伤有一定的保护作用。