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第一部分探讨SEA及γ分泌酶阻断剂对巨噬细胞极化方向的影响及细胞Notch信号通路的表达情况研究背景/目的培养巨噬细胞RAW264.7,探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA,soluble egg antigen)及γ分泌酶阻断剂DAPT对其极化方向的影响,以及Notchl/Jaggedl信号通路的激活情况并分析SEA作用的时间、剂量依赖性。方法培养RAW264.7细胞,经过SEA不同浓度和不同时间作用后,通过PCR、Western blot方法检测Notch1、Jagged1、Hes1等Notch信号通路相关基因及蛋白表达,Elisa、Western blot方法检测IL-10、IL-12、Arg-1、NOS-2等细胞极化方向的相关指标表达。γ分泌酶阻断剂DAPT作用于RAW264.7细胞后,SEA继续作用于细胞,同上方法分别检测Notch信号通路及细胞极化方向的指标。结果SEA作用于RAW264.7细胞后:(1)Notch1/Jagged1信号通路的相关指标如Notch1、Jagged1、Hes1等在mRNA及蛋白质水平表达较对照组均升高明显,且SEA的作用有时间-剂量依赖性,在SEA浓度为40ug/ml,时间为2小时时,上述指标升高最为明显;(2)在细胞极化方向,结果显示,M2极化方向的指标如Arg-1、IL-10对照组表达升高,而M1极化指标如NOS-2、IL-12对照组表达下降。γ分泌酶阻断剂DAPT作用于RAW264.7细胞后:(3)Notch1/Jagged1信号通路的相关指标如Notch1、Jagged1、Hes1较对照组表达下降;(4)在细胞极化方向,结果显示,M2极化方向的指标如Arg-1、IL-10对照组表达下将,M1方向的极化指标NOS-2、IL-12对照组表达升高。结论SEA可激活RAW264.7细胞的Notch1/Jagged1信号通路,促使细胞向M2方向极化,并且其作用呈时间-剂量依赖性。γ分泌酶阻断剂DAPT可阻断RAW264.7细胞的Notch1/Jagged1信号通路,逆转细胞向M2方向极化。第二部分建立小鼠血吸虫肝纤维化模型并探讨Y分泌酶阻断剂对模型小鼠肝肉芽肿和纤维化的影响研究背景/目的建立小鼠血吸虫肝纤维化模型,研究该模型中浸润的巨噬细胞表现出的极化方向,并探讨γ分泌酶阻断剂DAPT对肝纤维化的影响及其主要机制。方法(1)建立小鼠血吸虫肝纤维化模型。16只健康成年雌性Balb/c小鼠分为两组,一组为模型组,经皮感染日本血吸虫尾蚴,另一组为对照组,用PBS处理。感染8周后,分别处死两组小鼠,激光共聚焦法检测两组小鼠肝脏组织中F4/80、Arg-1、CD206的表达。(2)24只健康成年雌性Balb/c小鼠分为3组:对照组,模型组和DAPT干预组。模型组和DAPT干预组小鼠经皮感染日本血吸虫尾蚴,8周后DAPT干预组小鼠经腹腔注射DAPT(10mg/kg)每日一次。DAPT干预4周后,同时处死三组小鼠。苏木精-伊红染色和Masson三色染色法观察每个实验组小鼠肝脏情况,包括虫卵肉芽肿的平均大小(mm)及MOD半定量法检测胶原纤维的表达情况;激光共聚焦法检测小鼠肝脏组织中F4/80、Arg-1的表达;羟脯氨酸试剂盒检测小鼠肝脏组织中羟脯氨酸的含量。结果(1)激光共聚焦显微镜下可见模型组小鼠肝组织中表达F4/80的细胞聚集较对照组小鼠增多,同时这些细胞也表达Arg-1和CD206。(2)DAPT干预组小鼠肝组织中同时表达F4/80和Arg-1的细胞减少;DAPT干预组小鼠肝组织中肝肉芽肿大小、羟脯氨酸含量及胶原纤维沉较模型组均减少。结论小鼠血吸虫肝肉芽肿及纤维化组织的巨噬细胞聚集增多且呈向M2方向极化;阻断Notch1/Jagged1信号通路可调控巨噬细胞的极化方向并减轻小鼠血吸虫肝肉芽肿及纤维化。