枯草芽孢杆菌Czk1(Bacillus subtilis Czk1)对橡胶树根病菌和炭疽病菌具有拮抗作用,前期研究表明Czk1菌株对橡胶树炭疽病具有良好的生防效果,其可产生脂肽类抗生素对病原菌产生拮抗作用(樊兰艳,2013),但该菌株的其他防病机理尚不明确。本研究通过测定Czk1菌株在橡胶苗体内及根围土壤中的定殖动态,了解其对橡胶苗体内抗病相关防御酶活性的影响和对植株生长的作用,明确了 Czk1菌株的定殖能力、诱导橡胶树产生系统抗性及其促生作用,进一步丰富了该菌株的防病机理,为其在植物病害生物防治领域奠定基础。(1)利用抗生素标记法筛选得到能够耐受链霉素(100 mg/mL)及四环素(100 mg/mL)的标记菌株Czk1R。标记菌株Czk1R与原始菌株Czk1菌落形态无明显差异,生长曲线相似,对病原菌的拮抗效果无显著差异,且抗生素抗性稳定,符合定殖试验要求。(2)利用不同接种方式测定了标记菌株Czk1R入侵橡胶树的途径,其中静脉注射法接种菌株后,只可在茎部定殖,而灌根法和浸根法接种后菌株可在橡胶苗根部及茎部定殖,其中灌根法接种定殖效果最佳。测定菌株Czk1R在橡胶苗根、茎中的定殖动态发现,菌株入侵植株后,菌量呈现先增高达到最大定殖量后,缓慢下降趋于稳定,其中根部最大定殖量为8.33×103 CFU/g,茎部最大定殖量为8.98×102CFU/g,并且在同一时间内根部的定殖量始终大于茎部的定殖量;接种后60 d仍能在植株的根、茎中回收到标记菌株。测定标记菌株Czk1R在橡胶苗根围土壤中的消长动态发现,菌株Czk1R在灭菌土中的最大定殖量为6.44×106 CFU/g,在非灭菌土中的最大定殖量为1.20×106CFU/g,接种后土壤中的菌量呈缓慢下降的趋势,灌根处理60d后仍能从灭菌土中回收到标记菌株6.30×102 CFU/g,从非灭菌土壤中回收到标记菌株8.77×101 CFU/g。(3)通过测定菌株Czk1不同浓度发酵液(1倍原液,10倍稀释液,100倍稀释液)对橡胶苗叶片内CAT、SOD、POD、PAL和PPO 5种抗性相关防御酶活性的影响,明确其诱导橡胶树产生系统抗性的情况。结果表明,叶面喷施Czk1发酵液,可使橡胶叶片内5种防御酶活性升高,其中10倍稀释液诱导效果最佳,各酶活峰值均为照组的3倍以上。菌株Czk1还可诱导橡胶树对炭疽病产生抗性,先接种生防菌Czk1再接种病原菌RC178可使橡胶苗叶片中以上5种防御酶酶活显著增高,并且叶片中H202含量低于其他处理,说明菌株Czk1可以通过诱导橡胶树产生系统抗性来抵御炭疽病菌的侵害。(4)使用Czk1发酵液对橡胶苗进行连续灌根处理后,60 d测得处理组橡胶苗的株高、株高增长量、叶片数、叶鲜重、饱和重及叶干重等生物量均显著高于对照组,但相对含水量略低于空白对照组。同时,Czk1发酵液处理后橡胶苗叶片中叶绿素a和叶绿素b的含量显著提高,分别比对照组提高了 43.76%和42.75%,而MDA含量与其他两个对照组含量接近,无显著差异。说明施用菌株Czk1发酵液不会使橡胶植株中有毒性的MDA含量增,能够增强植株光合作用,促进植物生长发育。