论文部分内容阅读
目的：研究线粒体敲减对氡致HBE细胞恶性转化的影响方法：（1）采用溴化乙锭（ethidium bromide，EtBr）诱导法构建mtDNA拷贝数降低的HBE细胞株（HBE ρ-）。通过real-time PCR、mtDNA染色等测定mtDNA的缺失情况来验证HBE ρ-细胞。对HBE ρ-细胞及其亲代HBE ρ+细胞进行氡染毒和传代。并测定氡染毒后部分组别细胞的生物学特性，包括ROS、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡等。（2）采用软琼脂克隆实验、平板克隆实验、细胞划痕实验以及裸鼠皮下接种的动物体内实验，检测线粒体敲减对氡致人支气管上皮细胞恶性转化作用的影响。结果：（1）用EB诱导30d后，ρ+HBE细胞中的线粒体拷贝数减少了约77%，细胞浆内mtDNA的数量显著减少，活细胞工作站中可见线粒体DNA缺失，线粒体膜被破坏，线粒体膜电位下降，表明EB已成功诱导线粒体DNA缺失，建立了ρ-HBE细胞。细胞生物学特性检测显示染毒至Rn17时HBEρ+细胞中的ROS高于HBEρ-细胞中的（p<0.05）；随着染氡的进行HBEρ+细胞ΔΨm呈下降趋势，HBEρ-细胞ΔΨm呈上升趋势；氡染毒后HBEρ+Rn15细胞G1、S期延长，G2期阻滞，而在HBEρ-Rn15中G1期延长，G2、S期阻滞，染氡前HBEρ-细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡均低于于HBEρ+细胞；染氡7次以后HBEρ+和HBEρ-细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡都出现了明显的升高（P<0.05）；而在染氡12次时，无论HBEρ+细胞还是HBEρ-细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡都出现了明显的降低，而在染氡17次时，HBEρ+细胞以及HBEρ-细胞早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡又都出现了明显的升高。（2）经氡染毒后，ρ+HBE细胞软琼脂克隆形成率、细胞迁徙率明显高于ρ-HBE细胞，而平板克隆形成率低于ρ-HBE细胞（P<0.05）。裸鼠皮下接种HBEρ+、 HBEρ-、 HBEρ+Rn15P55、 HBEρ+Rn15P109、 HBEρ+Rn20P55、HBEρ-Rn15P55， HBEρ+Rn15P109成功成瘤，而其余组均未成瘤。提示HBEρ+Rn15P109具有明显的恶性细胞的特性。结论：1、采用EB诱导法成功构建了mtDNA部分敲减的人支气管上皮细胞株（ρ-HBE），并建立了氡染毒的细胞模型，为研究线粒体在氡致肺癌过程中的作用提供了试验基础。2、通过软琼脂克隆实验、平板克隆实验、细胞划痕实验和裸鼠体内成瘤实验，研究了线粒体敲减对氡致人支气管上皮细胞恶性转化的影响，发现HBEρ+细胞氡染毒后更易发生恶性转化。