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目的(1)探讨Ezrin,phos-Ezrin在正常皮肤(normal skin,NS)、脂溢性角化(seborrheic keratosis,SK)、基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)、皮肤鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC)中的表达及其与临床病理参数、预后之间的相关性。(2)研究黄芩素(Baicalein,BAI)对上皮鳞状细胞癌A431细胞的增殖、伪足及集落形成的影响,探索BAI对A431细胞无细胞毒性的最适抑制浓度范围。(3)探讨BAI抑制A431细胞增殖,影响A431细胞爬行运动及伪足形成的分子机制,明确BAI是否通过抑制Ezrin,phos-ezrin蛋白的表达来实现抗肿瘤侵袭转移的目的。方法(1)采用免疫组化法检测36例SCC、27例BCC和20例SK、10例正常人皮肤(normal skin,NS)中Ezrin及phos-Ezrin蛋白表达水平,COX回归分析二者与SCC预后的相关性。(2)以体外培养的人表皮鳞癌A431细胞为研究对象,用MTT法观察BAI对A431细胞的生长抑制作用;用光镜观察细胞生长的形态变化;扫描电镜观察siRNA及BAI对A431细胞伪足形成的影响;集落形成实验观察BAI对A431细胞的成瘤性的影响;细胞划痕实验检测BAI对A431细胞爬行运动的抑制作用;Trans-well检测BAI对A431细胞运动侵袭力的影响等细胞生物学行为的形态表现;(3)用流式细胞仪检测BAI处理A431细胞后,各期细胞比例和细胞凋亡率:RT—PCR检测BAI对A431细胞Ezrin蛋白mRNA表达量的影响;Western Blotting及免疫荧光技术检测BAI及siRNA对A431细胞Ezrin、phos-ezrin蛋白表达量的影响。结果1).Ezrin,phos-Ezrin在NS、SK、BCC、SCC中的阳性表达率分别为20.0%,10.0%;25.0%,15.0%;66.7%,77.7%和91.3%,97.2%,各组之间比较差异有显著性(P<0.01)。2).Ezrin,phos-Ezrin蛋白表达水平与皮肤肿瘤的性质、恶性程度(SCC的病理分级)、淋巴结转移密切相关(R1,r1=0.87,0.89;R2,r2=0.80,0.86;R3,r3=0.89,0.91,P<0.01,R1,R2,R3分别表示Ezrin与肿瘤性质,SCC病理分级,淋巴结转移的相关性;r1,r2,r3分别表示phos-ezrin与肿瘤性质,SCC病理分级,淋巴结转移的相关性)。3)MTT检测显示随着BAI作用时间的延长及剂量的增加对A431细胞增殖抑制作用增强,有明显的时间和剂量依赖性,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);光镜观察显示随黄芩素浓度的增大细胞生长速度明显受到抑制,形态变圆;电镜观察显示A431细胞伪足明显缩短,数量减少;Transwell证实不同浓度BAI处理A431细胞48h后穿过人工基底膜的细胞数量明显减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);同时BAI呈浓度依赖性地抑制A431细胞爬行运动。4)流式细胞仪检测显示随BAI浓度及作用时间的延长,细胞周期明显受到抑制,凋亡率显著增高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);BAI呈浓度依赖性地抑制A431细胞Ezrin,Phos-Ezrin及Ezrin-mRNA的表达,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。5)BAI呈浓度依赖地抑制A431细胞MMP2、MMP9蛋白的表达。各组两两比较差异有显著性(P<0.05)。结论1)Ezrin,phos-Ezrin表达水平在SK、BCC、SCC组织中与皮肤肿瘤的性质、恶性程度(病理分级)和淋巴结转移有关,两者呈平行表达关系,联合检测可能成为预测皮肤恶性肿瘤转移及预后的重要指标。2)BAI处理48h后,抑制A431细胞增殖而无细胞毒性的最适剂量范围为10μM-30μM。3)BAI通过直接或间接抑制Ezrin,phos-Ezrin表达而抑制A431细胞的增殖,侵袭运动,爬行运动,从而达到抗肿瘤增生及浸润转移的目的。