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microRNA是一种内源性短链非编码小RNA,其长度一般在22-24 nt。研究表明microRNA在脂肪细胞分化和脂肪代谢中发挥着重要作用。miR-9-5p调控了多种癌细胞、肝细胞和纤维细胞的分化与增殖过程,但miR-9-5p对脂肪细胞分化的调控仍未见相关报道。LEPTIN通过介导AMPK和JAK/STAT信号通路调控脂类代谢,且LEPTIN是miR-9-5p的一个潜在的靶基因,故推测miR-9-5p对前体脂肪细胞的分化有影响。本实验以刚出生新西兰白兔的脂肪组织为材料分离培养前体脂肪细胞,通过人工合成miR-9-5P类似物转染前体脂肪细胞后诱导分化,然后检测相关基因mRNA的水平。随后试验构建了pis-CHECH-LEPTIN-3’UTR和pis-CHECH-Mut-LEPTIN-3’UTR重组质粒,检测荧光素酶活性。为了进一步探索LEPTIN基因与家兔前体脂肪细胞分化的关系,通过siRNA转染细胞,然后检测相关基因mRNA的水平。最后利用Western-blotting检测过表达和抑制表达后PPARγ的蛋白水平。主要结果如下:(1)miR-9-5P的表达量在前体脂肪细胞诱导分化的过程中持续上调且在0d时表达量极显著低于9 d时(P<0.01);(2)leptin基因在1-3月龄家兔肾周脂肪组织中的表达量持续上调,3月龄的表达量显著高于1月龄的(P<0.01);(3)转染miR-9-5p模拟物mimic后,细胞内miR-9-5p的表达显著上调(P<0.01)。诱导前体脂肪细胞分化,结果显示mimic可以促进前体脂肪细胞分化,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα和FABP4基因的mRNA水平均显著上升(P<0.01),脂肪酸和甘油三酯的含量极显著增加(P<0.01)。转染miR-9-5p抑制剂,细胞内miR-9-5p的表达显著下调(P<0.01)。诱导前体脂肪细胞分化,结果显示inhibitor可以抑制前体脂肪细胞分化,标志基因PPARγ、C/EBPα和FABP4基因的mRNA水平均显著降低(P<0.01),脂肪酸和甘油三酯的含量极显著降低(P<0.01);过表达miR-9-5p后,可以上调PPARγ基因mRNA和蛋白质的表达水平(P<0.01)。抑制表达miR-9-5p后,下调了PPARγ基因mRNA和蛋白质的表达水平(P<0.01)。(4)通过双荧光素酶系统检测发现,leptin是miR-9-5p的一个靶基因。(5)通过干扰细胞内源性leptin基因的表达后发现,leptin的表达量明显下降,分化相关基因C/EBPα、PPARγ和FABP4基因的mRNA水平均显著上升(P<0.01),与过表达miR-9-5p实验结果一致。综上所述,miR-9-5p通过作用leptin基因促进家兔前体脂肪细胞分化。