与对虾血蓝蛋白具有相似抗原决定簇的副溶血弧菌外膜蛋白的鉴定及其免疫学意义的研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luxinyiu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
随着对虾养殖业的快速发展,养殖过程中爆发的细菌性疾病给对虾养殖业造成了严重的经济损失。为此,学者们认为深入揭示病原菌侵袭对虾的分子机制是解决对虾养殖疾病的有效途径之一。有趣的是,课题组前期研究意外发现,兔抗虾血蓝蛋白抗体可与副溶血弧菌某些外膜蛋白发生明显的交叉反应,但该外膜蛋白的性质及其在侵染对虾过程中的地位尚不清楚。为此,本研究采用蛋白质组学、分子生物学、生物信息学、免疫学等策略对其进行了较为深入的研究,所获主要结果如下:  首先,采用SDS-PAGE、2-DE、Western-blotting、MALDL-TOF-TOF/MS等蛋白质组学技术,发现与兔抗血蓝蛋白抗体发生交叉反应的副溶血弧菌外膜蛋白为LamB蛋白。  继而,采用分子生物学策略,对LamB蛋白进行基因克隆与原核表达,成功获得 LamB重组子(pMD-19-T-LamB和pET-32a(+)-LamB)及其原核表达蛋白(rLamB)。在此基础之上,进一步运用亲和层析、Western-blotting和Dot-ELISA等技术证实 rLamB蛋白确实可以与兔抗虾血蓝蛋白抗体发生交叉反应,与蛋白质组学鉴定结果一致。尤其值得一提的是,抗原表位预测发现LamB蛋白与对虾血蓝蛋白可能存在11个相似的同源性抗原表位。由此推测,副溶血弧菌 LamB蛋白应该是一种与对虾血蓝蛋白具有相似抗原决定簇的蛋白。  最后,采用免疫共沉淀、LC-ESI-MS/MS等技术,发现LamB蛋白可能可与对虾血浆中的β-1,3-葡聚糖结合蛋白(beta-1,3-glucan-binding protein,LGBP)、β-肌动蛋白(beta-actin)、Toll2、肌动蛋白T2(actin T2)、烯醇酶(enolase partial)、精氨酸激酶(arginine kinase,AK)和血蓝蛋白(hemocyanin,HMC)等7种蛋白发生相互作用。在此基础上,进一步采用Real-time PCR技术分析rLamB蛋白刺激对虾后,其4种相互作用蛋白(β-1,3-葡聚糖结合蛋白、血蓝蛋白、toll2和精氨酸激酶)在mRNA表达水平的变化。结果显示,该4种对虾免疫因子表达量均出现“先下降后上升再下降”的模式,除精氨酸激酶12h下降最为明显之外,其它3种免疫因子均在6h下降最为显著。由此提示,在副溶血弧菌侵袭对虾早期,副溶血弧菌有可能通过其LamB蛋白对对虾宿主重要免疫因子进行负调控。  综上所述,本研究首次在副溶血弧菌中发现一种与其宿主免疫因子(血蓝蛋白)具有相似抗原决定簇的外膜蛋白LamB,且LamB蛋白对其宿主主要免疫因子表现出较好的负调控作用。所获研究结果对揭示副溶血弧菌感染对虾的分子机制具有重要意义,同时为对虾病害的免疫学防治提供了重要的科学依据,促进对虾养殖业健康、持续发展。
其他文献
空域滤波方法与目标方位估计方法是阵列信号处理领域的两个重要研究内容,已广泛应用于声呐与雷达等领域中。空域滤波器能够抑制空间不感兴趣扇面内的干扰和噪声,并使感兴趣方位
本论文于2012年2月(冬季)和8月(夏季)对大亚湾中沉积物中叶绿素a和脱镁叶绿酸的含量与分布进行分析;对表层沉积物底栖硅藻的种类组成、丰度、优势种和分布特征进行了研究;并运用
珊瑚礁是这个星球上最壮观而又宝贵的海洋生态系统。珊瑚礁在塑造热带海洋生态系统的多样性、记录和保存环境变化信息、保护脆弱的海岸、为人类提供药物和食物来源,并且在渔业
0引言广电运营商网络数字化改造后,市场规模并没有如预期喷井式的爆发,从内部组织管理来看,适应市场的组织体系架构尚未建立,人员意识及能力存在不足,如何面对市场竞争,广电
省级党委办公厅的信息工作在整个信息系统中起承上启下作用,既为中央领导和省委领导服务,又为省直厅局、基层党委和人民群众服务。搞好省一级党委系统的信息工作,必须把握好
20世纪中国古代绘画出现了不曾有过的深刻变化。新文化运动的发展、西方绘画日益猛烈的冲击以及战乱和动荡都降低了古代绘画的地位。50年代以后,由于战后经济、文化的全面复苏,中国古代绘画的文化价值和意义在更广泛的范围内重新被人们认识,研究和收藏也进入了一个前所未有的复兴时期。这背后则蕴含着许多书画收藏大家的不懈努力,王季迁就是其中的佼佼者。  从“过云楼”到“梅景书屋”,再到“溪岸草堂”,王季迁对中国古
近年来海水养殖业发展迅速,饲料原料资源紧缺、养殖成本过高、养殖环境恶化等问题日益突出,阻碍了海水养殖业的发展。因此,寻找新的可持续饲料原料势在必行。利用大型海藻为饲料
7月28日,市委党校召开“深入学习中央关于取缔‘法轮功’的决定,进一步揭批‘法轮功’”座谈会。20余位教师、干部参加了座谈会。与会同志座谈发言综述如下:与会教师、干部一致拥护中
语文教学的最终目的,就是提高学生的表达能力。从入学之初开始接触语文,学生的读书生涯就再也不会离开语文。而在日常生活中,我们更是离不开语文,足见语文在人们生活中的重要
在政策和基本面的博弈下,大盘指数开始震荡前行,纵观后市,经济基本面向好,紧缩政策依然会持续。CPI高企,把钱存在银行意味着绝对财富的缩水。佐卓表示,在当前的市场行情下,股