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[背景]B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)为革兰氏阳性球菌,是围产期和新生儿感染疾病的首要致病菌。GBS按其型的特异性可分为至少10个血清型,任何血清型都能引起早发型GBS感染。已有研究发现,GBS还可引起尿路感染、羊膜炎、产后子宫内膜炎、伤口感染、产时和/或产后菌血症以及死产,生殖道GBS菌落可引起胎膜早破或早产,GBS也已成为新生儿出生后2个月内菌血症和脑膜炎的最常见致病菌。目前的GBS检测方法有:病原分离、革兰氏染色、免疫荧光抗体检测、血清淀粉培养基比色法,检测抗原的多种方法如同协同凝集试验、乳胶凝集试验和酶联免疫吸附试验、以及DNA探针,但血清学方法多存在耗时、耗力、准确率低等缺点,而新发展的快速检测分子生物学的常规方法在某些方面可以弥补血清学的不足,但是环境污染、重复性不高、灵敏度不足、假阳性等限制了推广应用。[目的]建立合理检测方法,快速检测孕妇感染的B族链球菌。[研究方法]本研究采用了实时荧光PCR扩增特异性DNA靶片断,使用荧光标记的杂交探针进行检测并实时监测扩增产物。通过对GBS引物探针的验证、最低检出险、线性范围、准确性、特异性、干扰物质、重复性等进行评价,采用荧光PCR法与序列分析法同时对样本进行检测,综合各种检测方法检测结果,对荧光PCR法试剂进行灵敏度、特异性、总符合率、Kappa值一致性评价及Kappa值的假设检验(U),评价临床考核试验的真实性及可靠性。[结果]结果显示:本反应体系的灵敏度确定为1×104CFU/ml,线性范围为1×108copies/ml—2×103copies/ml,准确率为100%,特异性良好、不存在干扰,精密度参考品变异系数CV均小于5%,重复性符合要求。用建立的方法检测苏州大学附属第一医院200份样本,37份阳性全部检出,163阴性全部为阴性。[结论]通过性能评价试验和临床样本验证,本研究建立的实时定量荧光PCR方法是一种特异性强、灵敏度高,重复性好,快速安全的检测方法,可以用于GBS的快速检测。