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核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)属于死体营养型植物病原真菌,寄主范围极为广泛。由该菌引起的菌核病是我国油菜的最重要病害,每年造成巨大的经济损失。对菌核病高抗的植物材料匮乏,农业防治费时费力且因为该菌产生菌核而效果不佳,而化学农药防治则易产生抗药性和环境问题。因此,对该病害的生物防治具有巨大的开发应用潜力。本研究以核盘菌为靶标筛选有效的拮抗菌,分析其抑制核盘菌生长的作用机制及对油菜抗病性和生长的影响,旨在为研制新的抗菌核病生防制剂提供潜在的菌种资源和应用基础。获得的结果如下:(1)筛选获得一批核盘菌拮抗菌。从油菜根围和核盘菌菌核分离出细菌590株,真菌75株,通过平板对峙培养从中筛选出核盘菌的拮抗菌45株,其中细菌35株,真菌10株。35株拮抗细菌中无菌滤液对核盘菌有抑制作用的有28株,其中24株生防菌的拮抗作用能连续10代以上稳定遗传。经离体叶片和盆栽整株油菜上防效的反复检测,防效高且稳定的有6株,分别是S4、S5、S6、S7、S10和S14。其中菌株S4、S5和S6的防效最好,盆栽整株油菜上防效均稳定在81%以上,最高达97%。(2)鉴定明确7株拮抗菌。拮抗菌S4、S5和S6经过形态观察、16S rDNA序列分析、脂肪酸鉴定和生物质谱分析,确定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。另外,喷施菌液后导致油菜腐烂发臭的菌株83和84经过16S rDNA序列分析初步判定为胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum);菌株111和250在PDA平板上产生蓝色非扩散色素和黄绿色可扩散荧光色素,经16S rDNA序列分析和烟草过敏性测试鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。(3)明确了拮抗菌S4、S5和S6的拮抗作用机制和生防应用潜力。这三株拮抗菌对植物病原真菌具有广谱拮抗作用。拮抗菌代谢产生的挥发性物质和外泌非挥发性物质均对核盘菌有抑制作用。它们能外泌几丁质酶、蛋白酶和纤维素酶。拮抗菌菌液的乙酸乙酯粗提物对核盘菌有抑制作用。拮抗菌菌液喷施油菜植株可显著诱导植株产生对核盘菌的抗性,病斑直径抑制率达66%-83%,但菌液灌根、浸种、涂叶处理均不能诱导油菜在地上非处理部位产生对核盘菌的系统抗性;而拮抗菌和油菜在组培瓶中共培养则能显著诱导植株产生系统性抗性,病斑直径抑制率达43%-66%。这些拮抗菌能在油菜根部富集,抑制主根伸长,促进侧根的形成和生长。开展了油菜响应拮抗菌S6的蛋白质组学分析,拮抗菌S6共培养与否相比较,分别有270个和259个蛋白在根部和叶部差异表达2倍以上,分别包括数十个抗病相关和活性氧积累和氧化还原调节相关蛋白。根部和叶部活性氧积累和氧化还原状态调节差异显著,拮抗菌S6能抑制植株根部活性氧积累,以利于自身生长和定殖。