金黄色葡萄球菌噬菌体的分离及其裂解性能的研究

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金黄色葡萄球菌是一种广泛存在的革兰氏阳性病原菌,能够引发心内膜炎、骨髓炎、肺炎、食物中毒等。目前,虽然可以采用物理或化学方法控制金黄色葡萄球菌污染,也采用抗生素控制金黄色葡萄球菌感染,但随着菌株对抗生素的耐药性越来越强,这些方法的控制效果不断降低。本文从污水环境中分离到一株特异性杀灭金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC6538的噬菌体,并对它进行了类别鉴定、生物学性能分析、在食品中的抗菌性能分析及其结合于宿主菌的吸附位点研究。主要工作如下:1.分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,并进行了类别鉴定和生物学性能研究。从环境污水出发,以金黄色葡萄球菌ATCC25923和ATCC6538为出发菌株,筛选到一株特异性噬菌体,命名为JS01。透射电镜图像显示,它属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;其基因组部分片段的测序结果显示,它与一些长尾科金黄色葡萄球菌噬菌体具有较高的相似度,最高相似度为73.21%,证实JS01为一种新型的长尾科噬菌体。生物学性能分析表明,它与大多数噬菌体有相似的生物学特性,但它有较强的耐热性和比较窄的pH作用范围。JS01能够在5min之内完成对宿主菌的吸附,作用于金黄色葡萄球菌ATCC25923时的潜伏期为40min,裂解量为86pfu/cfu。噬菌体JS01对金黄色葡萄球菌ATCC25923的裂解效果非常好,在1h内可以使培养液中的活菌数降低4.8个数量级。2.分析了噬菌体JS01对三种食品中污染的金黄色葡萄球菌的抑制效果。结果显示,噬菌体JS01对牛奶中污染的金黄色葡萄球菌ATCC25923具有很高的抑制作用。在4℃以及22℃条件下,当噬菌体感染复数MOI大于10时,可以使牛奶中污染的金黄色葡萄球菌数降至0cfu/mL。噬菌体JS01对热狗中污染的金黄色葡萄球菌也具有较高的抑制作用,当MOI为1.0时,可以使热狗中污染的金黄色葡萄球菌数量降为0cfu/mL,并持续2-3d。噬菌体JS01对酸奶中污染的金黄色葡萄球菌则不具有明显的抑制作用,这与它对酸性环境的敏感有关。3.从噬菌体JS01对金黄色葡萄球菌ATCC25923的裂解培养液中分离得到一株对噬菌体不敏感的突变菌株(BIM菌株),命名为ATCC25923R。ATCC25923和ATCC25923R细胞表面磷壁酸的气相色谱-质谱联用分析显示,两者的磷壁酸结构存在微弱差异,ATCC25923R的磷壁酸结构中多一种戊糖组份。分析了葡萄糖、N-乙酰-D-葡萄糖胺、ATCC25923和ATCC25923R的磷壁酸、肽聚糖以及荚膜多糖对噬菌体JS01裂解能力的影响,证实N-乙酰-D-葡萄糖胺为噬菌体裂解ATCC25923时的吸附位点。本论文分离到一株能够高效、特异性杀灭金黄色葡萄球菌的噬菌体JS01,并证明噬菌体JS01对几种即食食品有很好的保护作用。虽然随着噬菌体裂解时间的延长产生了BIM菌株,但不影响对食品中污染菌的控制效果,因此,噬菌体JS01可以被用作一种有效的、安全的控制病源菌金黄色葡萄球菌的抗菌剂。
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