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病原菌感染是全球人口死亡的主要原因之一,目前病原菌的控制仍然依赖抗生素,抗生素通过影响病原菌生长和生存实现抗感染作用,在这种生存压力下,病原菌很容易产生耐药性。随着耐药菌株的出现,传统抗生素无法完全抑制这些病原菌的生长,新发现的抗生素的靶点和机制与传统抗生素相似。因此,我们需要寻找抑制耐药菌的新策略和方法。毒力表示病原体致病能力的强弱,构成细菌毒力的物质称为毒力因子。细菌的分泌系统是一类重要的毒力因子,其中Ⅲ型分泌系统(T3SS)是近几年研究最成熟和最深入的系统之一。抑制T3SS而不杀死细菌,减弱细菌的致病性而不产生耐药性,因此Ⅲ型分泌系统是一类具有很大潜力的新型抗菌作用靶点。缅甸具有丰富的植物资源和治疗各种疾病的传统知识,为本研究提供丰富的样品与新思路。本研究论文对93种缅甸药用植物提取物进行了抗菌和抗毒力活性筛选。纸片扩散法抗菌活性筛选,发现铁力木(Mesua ferrea L)(My10),多叶姜黄(Curcuma comosa Roxb.)(My67)和云南黄连(Coptis teeta Wall.)(My109)的提取物对金黄色葡萄球菌生长有较好的抑制作用;曼森梧桐(Mansonia gagei J.R.Drumm)(My3)和铁力木(Mesua ferrea L.)(My10)的提取物对变形杆菌有较好的生长抑制作用;抑制鼠伤寒沙门菌T3SS毒力蛋白分泌的活性筛选结果表明三叶藤(Luvunga scandens(Roxb.)Buch.-Ham.exWight&Arn)(My7),毛杨梅(Myrica nagi Thunb.)(My11),诃子(Terminalia citrina Roxb.ex Fleming)(My21),莳萝(Tymus vulgaris L.)(My49)和钝叶桂(Cinnamomum bejolghota(Buch.-Ham.)Sweet)(My104)的提取物对T3SS毒力蛋白 SipA、SipB、SipC和SipD的分泌有较强的抑制作用,且对鼠伤寒沙门菌的生长没有明显影响。本论文选择对沙门菌毒力蛋白分泌抑制活性较好的植物诃子(Terminalia citrina Roxb ex Fleming)进行活性成分的追踪分离,得到活性化合物My21-1。对My21-1进行了抑制T3SS的初步作用机制研究,结果表明My21-1能够浓度梯度依赖的抑制毒力蛋白的分泌且不影响沙门菌的生长;在沙门菌侵袭HeLa细胞的实验中My21-1处理组总蛋白(Total),菌体胞内蛋白(Intracellular)和上清蛋白(Supernatant)的SipC水平都明显低于空白对照组,表明My21-1可以抑制沙门菌的对HeLa细胞的侵袭,推测My21-1抑制是沙门菌毒力蛋白的转录和翻译的表达水平。在鼠伤寒沙门菌中,分别对hilD和hilA进行高表达。用SDS-PAGE方法检测高表达菌株上清中毒力蛋白SipC水平,确定My21-1的作用靶点。结果显示,与χ8956菌株相比,pWSK29-hilD-pBAD χ8956菌株和pWSK29-hilA-pBADχ8956菌株都能够促进毒力蛋白SipC的分泌;在pWSK29-hilD-pBAD χ8956菌株中,My21-1对T3SS毒力蛋白SipC的分泌水平有微弱的抑制作用,My21-1可能调控HilD下游转录调控因子;在pWSK29-hilA-pBAD χ8956菌株中,My21-1对T3SS毒力蛋白SipC的分泌水平都没有明显影响,My21-1可能调控HilA上游的转录调控。因此,My21-1可能抑制hilA的转录水平,从而抑制T3SS毒力蛋白的分泌。