疣状表皮发育不良相关性人乳头瘤病毒(epidermodysplasia verruciformis-associated human papillomavirus，EV HPV)是一组双链环状小DNA病毒，主要包括HPV-5、8、9、12、14、15、17、19-25、36-38、47、49等。对上皮细胞具有极强的亲嗜性，EV HPV最初仅被发现于一种罕见的遗传性疾病—疣状表皮发育不良(epidermodysplasia verruciformis，EV)中。随着PCR技术的发展，人们发现，在免疫功能未见异常的健康志愿者的表皮中，也可以检测到EV HPV的DNA。在非黑素性皮肤肿瘤、角化棘皮瘤中，EV HPV DNA的检出率大大高于正常人。这使得人们开始思考EV HPV在EV以外的疾病中可能起到的作用。 最近，有学者在银屑病患者的皮损中发现，EV HPV DNA的检出率远远高于正常人，在银屑病患者的血清中，也检测到了抗HPV-5和抗HPV-8的抗体。由于HPV(Human Papillomavirus，HPV)在世界各地的分布可能存在一定的差异，所以我们认为检测中国银屑病患者皮损活检标本和刮屑标本中的HPV DNA以及探索HPV与银屑病发病的关系具有重大的意义。 HPV具有一定的成瘤性，可导致癌前病变以及恶性肿瘤的发生。生殖器外老年疣是一种良性表皮肿瘤，尚无明确病因。因其皮损形态和病理表现均与寻常疣有一定的相似之处，所以有人尝试过在生殖器外老年疣患者的皮损中检测人乳头瘤病毒。由于受到检测方法、引物及探针的限制，至今还没有得到肯定的结果。有人在生殖器部位的老年疣皮损中检测到了HPV DNA，但另有人认为HPV DNA阳性的生殖器部位的老年疣就是尖锐湿疣。因此，本文选用EV HPV的特异性通用引物，用敏感的巢式PCR方法检测了55例生殖器外的老年疣标本，希望找到老年疣皮损中HPV DNA存在的证据。 毛囊角化病虽然是一种遗传性疾病，但其疣状增生以及皱襞部位的乳头瘤样增生却类似HPV感染的表现。因此我们推测毛囊角化病或其乳头瘤样病损可能是在一定的遗传背景下合并了HPV的感染。所以我们检测了两例毛囊角化病患者的皮损活检标本和刮屑标本，初步探讨HPV DNA存在的可能。维甲酸类药物有很强的抗乳头瘤作用，因此我们选用了一种三代维甲酸类药物一芳维A酸乙醋来观察其对毛囊角化病的疗效。 为了提高HPV DNA的检出率，我们共选用了3组HPv的通用引物(MY09/l1;C玛5/70和CP66/6 9;FA巧9/64)及一对p珠蛋白引物作内对照。运用PCR方法检测了62例银屑病患者、55例老年疵患者、2例毛囊角化病患者和48例免疫功能未见异常的健康志愿者。对两例阳性患者的PCR产物进行回收，以鉴定其型别，测定DNA序列。结果如下: 1.EV HPV的种类繁多，因此选择一组适宜的引物对于今后的检测工作极其重要。在三组HPV的通用引物中，MY09八1是针对嗜粘膜性HPV设计的，因此只在阳性对照标本(以HPV一16质粒和尖锐湿庆活检标本中提取的总DNA为模板)中检测到了HPV的DNA，在银屑病患者和正常对照的活检标本和刮屑标本中均呈阴性。FAP59/64可以检测出65个型别的HPV DNA，在我们的实验中，所有的作为阳性对照的HPV质粒均可扩增出预期的 DNA片段。可能由于选用的是一步法的PCR，而待检标本中病毒的含量又极其微小，故用FAP59之64作为引物扩增银屑病患者和正常对照的标本时没有得到较高的阳性结果。而引物对cP65/7o和cP66/69则显示了强大的优势。它是针对EV HPV所设计的引物。由于它选用了巢式PCR，对标本中的HPV DNA进行两次特异性扩增，因此既提高了检测的灵敏度，也提高了检测的准确度。在我们的实验中，两次扩增之后HrV DNA的阳性率要远远大于外引物单次扩增之后的阳性率，进一步证明了巢式PCR的优越性。 2.银屑病患者皮损活检标本中Ev HPv DNA的阳性率为77.4%(48/62)，而健康志愿者皮损活检标本中的阳性率只有27.1%(13/48)，是银屑病标本的三分之一(xZ二25.749;p<0.005);在银屑病皮损和非皮损处的刮屑中，EV HPV DNA的阳性率分别为51 .9%和48 .4%，而正常人的刮屑只有18.8%，远远小于银屑病患者(x，二13.745和ro.384冲值均小于0.005)。这说明在银屑病患者和正常人的刮屑中也可以检测到EV HPV的DNA。刮取皮屑较切取组织块更方便，损伤较小，易于被患者接受，所以从刮屑标本中检测HPv更适于做大样本的普查。在中国地区的银屑病患者中检测EV HPV的DNA为国内外首次报道。 3.经统计学分析，银屑病患者皮损活检标本中EV HpV DNA的检出率与患者的性别、年龄、病程、皮损形态、遗传因素等无关，但似乎与皮损面积 二”.「~_一—一一一一一一一一一一----一-一--一-一占体表总面积的百分比有关。大于体表面积50%的，检出率为90.9%(10/11);20%到50%之间的，检出率为80.0%(28/35);小于20%的，检出率只有62.5%(10/16)。由于我们的样本数较小，统计学分析未能证实其显著性。 4.在生殖器外老年庆患者的皮损中，HPV DNA的检出率为76.4%(42/55)，而正常对照只有27.1%(13/48)，HPV DNA的检出率在老年优患者的皮损和正常对照之间的差异非常显著(xZ=22.087;p<0.005);在隆起明显的皮损中，EV HPV DNA的检出率为76.9%(30/39)，在隆?