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直肠癌传统的治疗方法主要是手术切除、放射治疗和化学药物治疗，这些方法对早期肿瘤可获得较好疗效，但对晚期肿瘤和术后复发及转移者，常难于获得理想效果。近十年来，肿瘤的基因治疗取得了很大的发展，Fas/FasL等凋亡基因治疗肿瘤已成为热点。目的：克隆人的Fas/FasL基因及其真核表达载体构建。探讨Fas/FasL基因转染联合顺铂对直肠癌细胞的杀伤作用。为临床治疗RC和肿瘤的术后复发及转移提供理论依据。方法：采用RT-PCR技术从健康人的外周血单核细胞中扩增包含全部阅读框架的Fas/FasL全长基因，与pGEM-T Easy质粒连接，经测序验证。构建pcDNA3.1-Fas/FasL真核表达载体，将人Fas/FasL基因通过脂质体导入直肠癌8348细胞株中,并利用RT-PCR方法检测直肠癌8348细胞的Fas/FasL基因mRNA表达。用MTT法分析顺铂对转染前后直肠癌细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用。结果：RT-PCR扩增Fas/FasL的PCR产物经限制性内切酶酶切后生成的片段符合预期大小。氨苄青霉素抗性的克隆经测序证实得到的正常人Fas/FasL基因与发表于GeneBank上的序列相比，完全正确。pcDNA3.1-Fas/FasL重组质粒经XhoI+EcoRI双酶切消化后,电泳后显示的目的基因片段和5400bp的pcDNA3.1载体片段,证明重组质粒完全正确；经RT-PCR方法检测Fas/FasL基因在转录水平mRNA表达，表明质粒转染直肠癌8348细胞后Fas/FasL基因mRNA表达明显增强。Fas基因转染可明显增强直肠癌8348细胞的Fas表达,分别用1、5、10、20、40mg/L浓度的顺铂作用，转染Fas基因的8348细胞实验组细胞抑制率分别为47.2%、51.8%、57.2%、65.4%、71.0%；未转染Fas基因的8348细胞对照组细胞抑制率分别为29.6%、33.0%、37.8%、41.4%、47.0%，其差异有显著性意义（t=15.33,p<0.01）。FasL基因转染可明显增强直肠癌8348细胞的FasL表达,顺铂对转染后的8348细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显下降。分别加入不同浓度顺铂（1、5、10、20、40g/ml），转染FasL基因的8348细胞实验组细胞抑制率分别为11.0%、25.4%、31.2%、37.8%、42.4%；未转染FasL基因的8348细胞对照组细胞抑制率分别为26.1%、34.4%、37.6%、42.9%、53.2%，其差异有显著性意义（t=4.43,p<0.05）。结论：采用RT-PCR方法成功克隆了正常人Fas/FasL基因并正确构建了其真核表达载体,为进一步研究Fas/FasL基因的功能奠定了基础。转染的Fas基因可显著上调直肠癌8348细胞的Fas表达,促进细胞凋亡,Fas基因转染联合顺铂对直肠癌细<WP=8>胞有更强的杀伤作用。转染的FasL基因可显著上调直肠癌8348细胞的FasL表达,抵抗细胞凋亡,FasL基因转染可减弱顺铂对8348细胞的细胞毒作用，为临床治疗直肠癌术后复发及转移提供了理论依据