中国鼠传巴尔通体遗传多样性及系统发育进化分析

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目的:调查了解巴尔通体在中国不同地区啮齿类动物中的种群分布及流行特征,并研究鼠传巴尔通体在中国的遗传多样性及其系统发育进化关系,为预防和控制巴尔通体的人间感染提供基础数据。方法:1.本研究依据中国动物地理区划选取采样点,采用夹夜法捕捉啮齿类动物后无菌取其脾脏组织,在-80℃冰箱冷冻保存。2.将所采集的各脾脏组织样品在严格无菌条件下剪取绿豆粒大小于单管中制成匀浆,接种后的培养基置于培养箱中培养,调节培养箱内二氧化碳浓度为5%,温度为35℃。胰蛋白大豆琼脂培养基中混有5%脱纤维羊血。巴尔通体属的特异性基因枸橼酸合成酶基因(gltA)长度大小约为379bp;挑取巴尔通体的疑似菌落,PCR扩增该目的基因片段。依据琼脂糖凝胶电泳条带大小判断阳性菌株并进一步扩增其16SrRNA、细胞分裂蛋白基因(ftsZ)、RNA聚合酶亚单位基因(rpoB),将它们的扩增产物提交公司并进行基因测序。3.对所测gltA、16S rRNA、ftsZ、rpoB基因序列利用NCBI中的BLAST软件进行同源性比对,并利用MEGA7.0.21软件,采用多位点序列分析(Multilocus Sequence Analysis)对gltA、ftsZ、rpoB基因序列进行多重比对并进行人工校正,然后通过邻近法(Neighbor-joining Method)与最大似然法(Maximum LikelihoodMethod)构建分子系统进化树,分析系统发育进化关系。4.核苷酸及单倍型多样性分析采用DnaSP 5.10.01软件进行。结果:1.本研究共采集2826份啮齿类动物脾脏组织样品,涉及全国15个省市地区,检测结果显示,757份样品中存在巴尔通体感染,总感染率为26.79%(757/2826)。所测阳性样品隶属于3目,共9个科25个属62个种,不同种类的啮齿类动物的感染率不同。此外,不同调查地区有巴尔通体感染的啮齿类动物种类也不尽相同。2.各调查地区啮齿类动物的巴尔通体感染率存在差异,且不同调查地区分离到的巴尔通体基因型存在差异。其中格拉汉姆巴尔通体基因型分布于每个调查地区;除山西省与海南省外,其他调查地区都分离出2种及以上的巴尔通体基因型。3.序列的同源性以及遗传进化分析表明,所测啮齿类动物中主要存在12种巴尔通体基因型,即泰勒巴尔通体(B.taylorii)、格拉汉姆巴尔通体(B.grahamii).伊丽莎白巴尔通体(B.elizabethae)、日本巴尔通体(B.japonica)、特利波契巴尔通体(B.tribocrum)、森林巴尔通体(B.silvatica)、昆州巴尔通体(B.queenslandensis)、非洲跳鼠巴尔通体(B.jauli)、菲西巴尔通体(B.phoceensis)、黑瞎子巴尔通体(B.heixiaziensiB.马赛巴尔通体(B.rattimassiliensis)B.washoensis。结论:本研究调查发现巴尔通体在中国不同地区的多种啮齿类动物中存在感染,分布在广泛的地理环境中及具有宿主多样性特征;同时,遗传进化分析显示中国鼠传巴尔通体具有丰富的遗传多样性且可能有新种存在。由于啮齿类动物数量多、分布广且人居关系密切,其巴尔通体感染状况对人类巴尔通体病的发生有直接影响,因此进一步加强次类动物中巴尔通体感染状况的监测和研究意义重大。
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