特异性抗体定量检测葡聚糖方法的研究

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:franklee19851126
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在甘蔗制糖工业中出现的葡聚糖主要为α-葡聚糖(又称右旋糖酐,以下简称葡聚糖),是肠膜明串珠菌属产生的葡聚糖蔗糖酶将蔗糖转化为α-D吡喃葡萄糖(主要是α-(1→6)结构的葡萄糖)高分子聚合物多糖,其对制糖生产有较大影响,产生增大糖液的粘度,降低沉降速度、糖液的过滤性,使蔗糖结晶时生成异常形态的晶体等问题,因此,葡聚糖的实时监测成为糖厂生产控制的一个重要技术。目前,葡聚糖检测的主要方法是有着检测过程操作繁琐、检测时间长、检测结果准确度较低以及不适用于不同糖品等缺点化学分析方法。因此,建立一种方便快速、准确度高,稳定性好、适用于各种样品中葡聚糖的检测方法势在必行。本论文研究简便、快速、准确、价格合理的免疫学方法来测定葡聚糖的含量,使之适用于甘蔗制糖工业生产中的各种糖品中葡聚糖,对整个生产线中葡聚糖含量进行实时监测,为提高生产管理效率提供依据。主要研究内容和结果如下:(1)利用已制备好的抗葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞,接种到Balb/C小鼠腹腔内,产生含抗葡聚糖单克隆抗体腹水;收集腹水,经纯化后得到纯化抗体;摸索其冻干条件,进行稳定性试验,为葡聚糖免疫学检测国产试剂盒中抗体的保存打下基础。结果表明:通过纯化,抗体纯度可达到95%以上,葡聚糖特异性抗体的最佳冻干保护剂是浓度为10%的蔗糖,冻干后-20℃保存360天抗体效价变化不大。(2)研究比较《原糖》(GB15103-2006)国标法和免疫比浊法测定葡聚糖的方法,探讨了不同分子量葡聚糖、反应时间对各自标准曲线测定的影响。结果表明:两种方法的标准曲线均受葡聚糖分子量大小的影响,葡聚糖分子量大时影响较小,葡聚糖分子量小时,影响较大;最佳反应时间分别是20min±10s,1min50s。确定测试条件后,研究这两种方法检测葡聚糖T-500线性范围、检测下限、分辨率、准确度及重复性等参数。并对白砂糖、原糖、蔗汁样品进行加标回收及重复性试验。结果表明:当蔗糖浓度为16%时,原糖国标法测定葡聚糖T-500标准曲线为y=0.5206x-0.0035,线性范围25-1000mg/kg,检测下限13.4mg/kg,分辨率是25mg/kg,检测标准品糖液重复性RSD=0.84%,标准品糖液加标平均回收率为95.5%,检测部分样品重复性平均RSD(%)=1.85%,样品平均加标回收率93.6%;免疫比浊法测定葡聚糖标准曲线为T-500y=0.0937x+0.0266,线性范围是51.9-3750.Omg/kg,检测下限21.75mg/kg,分辨率为51.9mg/kg,检测标准品糖液重复性RSD=0.38%,加标平均回收率为100%,检测部分样品重复性RSD(%)=0.52%,平均加标回收率为99.9%,检测结果与标准品糖液高度-致。总的来说免疫比浊法要优于《原糖》(GB15103-2006)国标法。(3)研究抗体用量少的免疫比色法反应时间和加样量,探讨样品颜色对反应结果的影响,并确定其线性范围、检测下限、精密度和重复性等参数,之后又对白砂糖、原糖、蔗汁样品进行加标回收及重复性试验。结果表明:最佳反应时间13min、100u L抗体最佳加样量1μL,检测葡聚糖T-500线性范围是312.5~5000.Omg/kg,检测下限是221.3mg/kg,标准品重复性平均相对标准偏差RSD(%)=0.36,葡聚糖T-500标准品糖液平均加标回收率(%)=98.2%,略低于免疫比浊法,部分样品重复性平均相对标准偏差RSD(%)=0.56,另外两种样品加标回收试验的平均加标回收率(%)=98.6%,说明样品测定与标准品糖液高度一致。因此利用酶标仪的免疫比色法延续了免疫比浊法准确度高及重复性好的优点,但是其最低检测限太大,对葡聚糖浓度比较低的样品检测不灵敏,该方法用于测定低浓度样品时有待于进一步改进。(4)选定免疫比浊法对甘蔗糖厂生产线上在制品、成品及副产品中葡聚糖含量进行测定并加标回收。同时采用免疫比色法测定同样样品,比较两者测定结果。结果表明,免疫比浊法与免疫比色法测定结果基本一致。
其他文献
城市道路是城市机体的主动脉,近几年来,我国城市发展速度极为迅猛,城市用地不断扩大,城市功能也不断成熟,然而城市的发展扩张,首先需要建设城市道路,它是城市开发建设的基础
<正>关于长崎的华侨人口动态,其统计资料在明治十五年以后大体上都留了下来,但此前唐馆解体后的微妙的明治最初10年期间却没有留下什么数字。幸而长崎县立图书馆还留有许多这
期刊
改革开放以来,我国经历了长期高速的经济增长,经济发展成绩斐然。然而,随着经济规模的不断扩大,化石能源等常规能源的使用造成的环境问题及后果不断凸显。低碳经济成为未来经济增
技术创新成果转化可视为是知识资源互动的过程,知识转移的效果影响着企业的竞争力。显性知识互动过程具有可见性、规范性和易表征的特点;而隐性知识互动过程具有隐蔽性、复杂
犯罪现场勘查是刑侦工作的基础和前提,是侦破刑事案件的首要环节,在刑事侦查工作中占有举足轻重的位置,犯罪现场勘查质量的高低,直接影响整个刑事案件侦破工作的成败。为了贯
如果你的无线网络出现了问题,其原因可能是来自各个方面。当你试图解决这一问题时,可能会涉及硬件厂商以及网络配置等诸多因素。当一个无线网络发生问题时,你应该首先从几个关键
一些特殊的行业如出版业、摄像摄影、平面设计、医疗等行业,往往对桌面显示器的色彩精密度、输入和输出色彩的误差率等,有着更为专业、更苛刻的需求。因此,行业用户对桌面显示器
近日.国际知名外设厂商爱普生(中国)有限公司广州分公司召开了“爱普生南区俱乐部成立”大会,这个俱乐部是一个引导大家升级与创新的制度化平台,同时又是爱普生合作伙伴们沟通、交
随着我国改革开放的不断深入,企业迎来了更多的发展机遇。因此,企业应迅速投入到改革开放的经济浪潮中去,争取把我国的进出口贸易推向一个新层次。在此背景下,出口退税率的调
随着人们对城市环境质量要求日益提高,作为城市空间组成部分的道路,除满足交通功能、划分街坊、提供公用设施用地外,还应考虑城市景观设计的要求,做到道路与城市景观的协调设